本文關(guān)鍵詞： 腸道病毒71型 自噬 凋亡 病毒復(fù)制　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：近年來由腸道病毒71型(Enterovirus 71, EV71)感染而引起的手足口病發(fā)病人數(shù)在我國(guó)呈大幅上升趨勢(shì),缺乏合適的疫苗及有效的抗病毒藥物是控制EV71感染的主要障礙。而EV71致病機(jī)制的闡明無疑是解除這兩個(gè)障礙的有力手段。但到目前為止,EV71致病機(jī)制尚不明確。自噬和凋亡在病毒感染中起著關(guān)鍵的作用,一方面可以通過降解病毒成分,遞呈病毒抗原,激活機(jī)體免疫反應(yīng),從而達(dá)到清除病毒的目的；另一方面,病毒也可利用對(duì)自噬和凋亡的調(diào)控逃逸機(jī)體的抗病毒作用,維持自身的存活和復(fù)制。研究表明,EV71可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生自噬,也可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡,但自噬和凋亡的相互調(diào)控機(jī)制尚不明確。病毒感染細(xì)胞后,可引起細(xì)胞死亡,但同時(shí)病毒又必須借助活的細(xì)胞完成自身的復(fù)制過程。而目前EV71感染誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬和凋亡對(duì)EV71病毒復(fù)制和顆粒釋放的影響尚不明確。 本實(shí)驗(yàn)中,我們首先證實(shí)了EV71 (Fuyang-0805)病毒株能夠誘導(dǎo)RD-A細(xì)胞發(fā)生自噬和凋亡,然后研究了EV71誘導(dǎo)細(xì)胞自噬及凋亡對(duì)病毒產(chǎn)生和釋放的影響,在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討了EV71誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和凋亡的相互調(diào)控關(guān)系。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,EV71活病毒可誘導(dǎo)RD-A發(fā)生自噬,隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)和感染劑量的增加,自噬水平逐漸增強(qiáng)。自噬不同階段的抑制劑能夠抑制由EV71病毒感染誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的相應(yīng)階段。10μM的3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)能夠抑制EV71誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬,同時(shí)還能夠降低細(xì)胞培養(yǎng)上清中EV71病毒的滴度。EV71的活病毒能夠誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡,隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)和感染劑量的增加,凋亡水平逐漸增加。凋亡蛋白酶通用抑制劑Z-VAD-FMK能夠抑制EV71誘導(dǎo)的凋亡,同時(shí)也可以抑制EV71病毒顆粒的產(chǎn)生和釋放。另外,我們通過自噬和凋亡抑制劑的使用以及siRNA干擾自噬和凋亡相關(guān)分子的表達(dá),研究EV71誘導(dǎo)的自噬和凋亡的相互調(diào)控關(guān)系。結(jié)果證明,抑制自噬體的形成可以抑制細(xì)胞發(fā)生凋亡,而抑制自噬溶酶體的活性卻促進(jìn)了凋亡的發(fā)生。同時(shí),抑制凋亡可以促進(jìn)EV71誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬的發(fā)生,促進(jìn)凋亡可以抑制EV71誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬,凋亡底物PARP (poly ADP-ribose polymerase, PARP)減少可以抑制EV71感染誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬。 以上結(jié)果提示,通過使用合適劑量的抑制劑或誘導(dǎo)劑調(diào)控EV71誘導(dǎo)的自噬和凋亡來影響病毒顆粒的釋放,從而降低病毒毒力,緩解EV71病毒引發(fā)的疾病可能會(huì)為尋找新的抗EV71藥物提供新的思路。
[Abstract]:In recent years, the number of HFMD cases caused by enterovirus 71 (EV71) infection in China is on the rise. The lack of appropriate vaccine and effective antiviral drugs are the main obstacles to the control of EV71 infection. The elucidation of the pathogenesis of EV71 is undoubtedly a powerful means to remove these two obstacles. But so far. The pathogenesis of EV71 is unclear. Autophagy and apoptosis play a key role in viral infection. On the one hand, autophagy and apoptosis can activate immune response by degrading viral components and presenting virus antigen. In order to achieve the purpose of eliminating the virus; On the other hand, the virus can also use the regulation of autophagy and apoptosis to escape the body's anti-virus effect, maintain its own survival and replication. Apoptosis can also be induced, but the mechanism of autophagy and apoptosis is not clear. Virus infection can cause cell death. But at the same time, the virus must use living cells to complete its own replication process, but the effect of autophagy and apoptosis induced by EV71 infection on the replication and particle release of EV71 virus is not clear. In this study, we first confirmed that EV71 Fuyang-0805) could induce autophagy and apoptosis in RD-A cells. Then the effects of EV71 induced autophagy and apoptosis on the production and release of virus were studied, and the relationship between autophagy and apoptosis induced by EV71 was further discussed. The results showed that EV71 virus could induce autophagy of RD-A with the increase of infection time and dose. Autophagy level gradually increased. Inhibitors at different stages of autophagy could inhibit the corresponding stage of autophagy induced by EV71 virus infection. 3-methyladenine. 3-MA) can inhibit autophagy induced by EV71 and decrease the titer of EV71 virus in cell culture supernatant. EV71 live virus can induce apoptosis of cells. With the prolongation of infection time and the increase of infection dose, the level of apoptosis gradually increased. Z-VAD-FMK, a common inhibitor of apoptotic protease, could inhibit the apoptosis induced by EV71. We also inhibit the production and release of EV71 virus particles. In addition, we interfere with the expression of autophagy and apoptosis-related molecules through the use of autophagy and apoptosis inhibitor and siRNA. To study the relationship between autophagy and apoptosis induced by EV71. The results showed that inhibiting the formation of autophagy could inhibit apoptosis, while inhibiting the activity of autophagy could promote apoptosis. Inhibition of apoptosis can promote autophagy induced by EV71, and promote apoptosis can inhibit autophagy induced by EV71. The reduction of apoptosis substrate PARP ADP-ribose polymerase (parp) inhibited autophagy induced by EV71 infection. These results suggest that EV71 induced autophagy and apoptosis can be controlled by appropriate dose of inhibitors or inducers to affect the release of virus particles and thus reduce the virulence of the virus. Alleviating the disease caused by EV71 may provide new ideas for finding new anti-EV71 drugs.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R373

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李二樂;王東;馮蓉;安利;拓明祥;;淚道置管聯(lián)合鼻內(nèi)鏡治療鼻內(nèi)翻性乳頭狀瘤的效果觀察[J];海南醫(yī)學(xué);2012年10期

2 唐青海;喬憲鳳;安立國(guó);周荊榮;鄭新民;劉西梅;華文君;何維明;;豬乙腦快速診斷方法的建立與應(yīng)用[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年06期

3 王洪斌;董丹;許冰;周向紅;閻斌倫;;松果提取物的體外抗腺病毒活性研究[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年03期

4 駱萍;史湘英;車穎悟;;小兒EB病毒感染76例臨床分析[J];哈爾濱醫(yī)藥;2007年03期

5 解曉紅;;血清AFP、CEA、CA50在PHC中的應(yīng)用價(jià)值[J];哈爾濱醫(yī)藥;2011年02期

6 張潤(rùn)書;安會(huì)波;劉征燕;;熒光定量PCR快速檢測(cè)小兒巨細(xì)胞病毒感染標(biāo)本的選擇[J];河北醫(yī)藥;2009年23期

7 呂樹文;曹星華;宋立剛;關(guān)慧臻;楊亞平;薛承巖;;RNA病毒性腦膜炎的實(shí)驗(yàn)診斷研究[J];河北醫(yī)學(xué);2007年11期

8 牛衛(wèi)東;安戈;戴蕾;孫麗梅;史軍;;鄭州市手足口病病原學(xué)分析[J];華章;2011年25期

9 宋佰芬;李迎春;鄒珊;崔玉東;;牛干擾素-γ基因的克隆與真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào);2010年01期

10 李平;王運(yùn)良;謝鵬;婁季宇;;IL-6在小鼠單純皰疹病毒I型潛伏與再激活感染中的表達(dá)及意義[J];中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志;2006年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 韓金樂;賈繼宗;李川;楊亮;何德磊;李娟;葉祥忠;李益民;;腸道病毒71抗原ELISA定量檢測(cè)方法構(gòu)建及其應(yīng)用[A];第五次全國(guó)免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2011年

2 方美玉;任瑞文;劉建偉;;我國(guó)甲病毒的研究進(jìn)展及其預(yù)防[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點(diǎn)研討會(huì)論文集[C];2009年

3 戚鵬;韓金祥;魯艷芹;王傳璽;欒中華;卜范峰;;病毒編碼的miRNAs:基因表達(dá)新的調(diào)控因子[A];山東省藥學(xué)會(huì)2006年生化與生物技術(shù)藥物學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

4 劉悅越;劉艷;谷金蓮;于洋;國(guó)泰;;血清抗輪狀病毒IgA診斷試劑的研制[A];2010年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國(guó)藥師周論文集[C];2010年

5 周伯平;劉威龍;謝靖婧;陳心春;徐六妹;譚艷;劉映霞;楊桂林;;腸道病毒71型重組VP1蛋白的表達(dá)和EV71型手足口病血清學(xué)診斷方法的建立[A];全國(guó)第2屆中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會(huì)議暨國(guó)家中醫(yī)藥管理局第1屆傳染病協(xié)作組會(huì)議論文匯編[C];2008年

6 劉兆梅;溫瑞興;馬洪濤;;中藥青龍爪抗HIV-1病毒的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)防治艾滋病學(xué)術(shù)研討會(huì)暨2006年年會(huì)論文集[C];2006年

7 袁斌;任現(xiàn)志;孫軼秋;鄒建東;趙長(zhǎng)江;劉光陵;陳吉慶;趙德育;徐玲;;清肺口服液治療小兒呼吸道合胞病毒肺炎166例臨床研究[A];第25屆全國(guó)中醫(yī)兒科學(xué)術(shù)研討會(huì)暨中醫(yī)藥高等教育兒科教學(xué)研究會(huì)會(huì)議學(xué)術(shù)論文集[C];2008年

8 傅燕;高紅;劉健毅;;寧波地區(qū)嬰幼兒輪狀病毒VP7序列分析[A];2007年浙江省醫(yī)學(xué)病毒學(xué)、醫(yī)學(xué)微生物與免疫學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

9 張麗榮;;珠海市多起連續(xù)發(fā)生的乙型流感疫情的病毒HA1基因分析[A];新發(fā)傳染病研究熱點(diǎn)研討會(huì)論文集[C];2012年

10 趙連紅;;手足口病流行病學(xué)及防治研究進(jìn)展[A];第十四屆全國(guó)感染藥學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 姜淑貞;玉米赤霉烯酮對(duì)斷奶仔豬的毒性初探及改性蒙脫石的脫毒效應(yīng)研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 王蕾;單純皰疹病毒Ⅰ型VP26蛋白在病毒感染過程中的分子生物學(xué)功能分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2008年

3 時(shí)景偉;麻疹疫苗減毒機(jī)制及疫苗接種后我國(guó)麻疹流行病學(xué)特點(diǎn)的研究[D];吉林大學(xué);2011年

4 黃海燕;表達(dá)Apoptin基因重組腺病毒對(duì)肝癌細(xì)胞BEL-7402及轉(zhuǎn)移模型的抑制作用[D];吉林大學(xué);2011年

5 茅凌翔;腸道病毒71型分子流行病學(xué)調(diào)查及miRNA抑制腸道病毒71型體外復(fù)制的研究[D];江蘇大學(xué);2011年

6 徐娟;腸道病毒EV71 VP1基因的優(yōu)化和免疫原性的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

7 盧桂蘭;北京地區(qū)人偏肺病毒全基因組序列、血清流行率分析及B細(xì)胞表位研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

8 管瑩;與HSV-1 UL31相互作用的宿主蛋白TMEM140生物學(xué)功能研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

9 郭磊;HSV1 ICP22蛋白轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制研究及其與病毒蛋白VP16、ICP0對(duì)病毒基因轉(zhuǎn)錄的共調(diào)控作用分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

10 陳慧誠(chéng);腸道病毒71型滅活疫苗（人二倍體細(xì)胞）免疫后攻毒及未免疫攻毒恒河猴嬰猴丘腦組織的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 鄭毅;利用酵母雙雜交技術(shù)研究流感病毒NS2蛋白與宿主蛋白的相互作用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 盧士強(qiáng);甲型H1N1流感病毒NS1蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)、抗體制備及在血清學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2009年

3 張紹麗;河南省2008年手足口病病原體（EV71）分離株全基因組序列[D];鄭州大學(xué);2010年

4 于賀娟;腸道病毒71型熒光RT-PCR檢測(cè)方法的建立及評(píng)價(jià)[D];鄭州大學(xué);2010年

5 殷堅(jiān);秦香顆粒對(duì)人輪狀病毒致感染乳鼠血清IFN-γ、IL-2的影響研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2010年

6 雷紅娟;腸道病毒71型H6株在Vero細(xì)胞上的傳代適應(yīng)[D];河南師范大學(xué);2010年

7 費(fèi)永亮;新疆地區(qū)人群乙型肝炎病毒基因型的初步研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 岳鋒;豬瘟病毒感染靶細(xì)胞的配體表位研究[D];河南科技學(xué)院;2010年

9 郭延鋒;CSISV人工感染SPF雛雞和商品肉仔雞后免疫器官的細(xì)胞凋亡[D];河南科技學(xué)院;2010年

10 韓緒軍;HCV核酸檢測(cè)方法建立及藥物靶點(diǎn)變異分析[D];昆明理工大學(xué);2009年

，

本文編號(hào)：1451084