發(fā)布時間：2018-01-18 14:34

  本文關鍵詞：去抗原異種松質骨與兔成骨細胞組織相容性的實驗研究　出處：《成都中醫(yī)藥大學》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的：觀察不同方法制備的豬松質骨材料對異種抗原分布及表達的影響,研究不同方法制備的豬松質骨材料與乳兔來源的成骨細胞在體外復合培養(yǎng)后組織相容性的變化。為異種骨修復骨損關節(jié)病的臨床應用提供一定的實驗依據。 方法：分別采用深低溫冷凍法、酶消化法和深低溫冷凍加酶消化法制備豬松質骨材料。將實驗分為A、B、C、D組。A組：新鮮豬骨組、B組：深低溫冷凍組、C組：酶消化組、D組：深低溫冷凍加酶消化組。分別采用蘇木素—伊紅染色和免疫組織化學的方法觀察各組材料的組織學特征及α-Gal抗原、MHC-Ⅰ抗原和MHC-Ⅱ抗原的性狀、分布及表達變化。并將不同方法制備的B、C、D組的豬松質骨材料與兔成骨細胞進行體外復合培養(yǎng),采用倒置相差顯微鏡、普通光學顯微鏡、掃描電鏡觀察兔成骨細胞在豬松質骨材料中的黏附、生長及增殖特點。 結果：蘇木素—伊紅染色鏡下可見新鮮豬骨材料中廣泛分布骨陷窩、骨細胞、成骨細胞、大量的脂肪網架結構,內含骨髓細胞。深低溫冷凍骨材料中含大量的骨陷窩,含少量的骨細胞、成骨細胞、骨髓細胞及脂肪網架結構。酶消化骨材料中含大量骨陷窩,含極少量的骨細胞、成骨細胞,骨髓腔中未見脂肪網架結構。深低溫冷凍加酶消化骨材料中含大量骨陷窩,未見骨細胞、成骨細胞,骨髓腔中未見脂肪網架結構及骨髓細胞。免疫組化鏡下可見新鮮豬骨材料中α-Gal抗原、MHC-Ⅰ抗原廣泛表達在成骨細胞、骨髓細胞周圍,MHC-Ⅱ抗原表達在骨髓細胞周圍。深低溫冷凍組的骨基質中含少量骨細胞殘留,少量的膜蛋白表面有α-Gal抗原、MHC-Ⅰ抗原和MHC-Ⅱ抗原表達。酶消化組中骨陷窩內有少量骨細胞殘留,膜蛋白表面含少量MHC-Ⅰ抗原和MHC-Ⅱ抗原表達,未見α-Gal抗原表達。深低溫冷凍加酶消化組中未見α-Gal抗原、MHC-Ⅰ抗原和MHC-Ⅱ抗原表達。不同方法制備的豬骨材料與兔成骨細胞體外復合培養(yǎng)后,倒置相差顯微鏡下可見兔成骨細胞在B、C、D三個組別豬骨材料表面都有生長,掃描電鏡下可見深低溫冷凍加酶消化的豬骨材料表面有大量的細胞黏附、生長、繁殖并形成網狀結構,其細胞外形為星形、多邊形、多角形或短梭形,偽足交錯呈網狀覆蓋骨材料孔隙表面。單純酶消化的骨材料表面成骨細胞呈短梭形并延骨小梁排列,相互融合成網狀結構的較少。深低溫冷凍的骨材料表面有少量細胞生長、黏附,且細胞生長不充分。 結論：深低溫冷凍加酶消化可以有效的去除異種抗原,而單純采用深低溫冷凍可以明顯的減少異種抗原,但是不能完全的去除異種抗原。單純采用酶消化法可以明顯的減少cc-Gal抗原表達,但MHC-Ⅰ抗原和MHC-Ⅱ抗原不能完全去除。各組豬松質骨材料與兔成骨細胞體外復合培養(yǎng)后觀察到深低溫冷凍加酶消化制備后的骨材料在組織相容性方面優(yōu)于單純的深低溫冷凍和單純的酶消化法制備的骨材料。
[Abstract]:Objective: to observe the effect of porcine cancellous bone materials prepared by different methods on the distribution and expression of xenogeneic antigens. To study the changes of histocompatibility of porcine cancellous bone materials prepared by different methods and osteoblasts derived from newborn rabbits after co-culture in vitro, and to provide a certain experimental basis for the clinical application of heterogenous bone in repairing osteoarthropathy. Methods: porcine cancellous bone materials were prepared by deep cryopreservation, enzyme digestion and deep cryopreservation plus enzyme digestion. Group B: deep hypothermia freezing group: group C: enzyme digestion group. Group D: deep cryopreservation plus enzyme digestion group. The histological characteristics and 偽 -Gal antigen of each group were observed by hematoxylin eosin staining and immunohistochemistry. The characters, distribution and expression of MHC- 鈪，

本文編號：1441318