本文關(guān)鍵詞：去抗原異種松質(zhì)骨與兔成骨細(xì)胞組織相容性的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《成都中醫(yī)藥大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的：觀察不同方法制備的豬松質(zhì)骨材料對(duì)異種抗原分布及表達(dá)的影響,研究不同方法制備的豬松質(zhì)骨材料與乳兔來源的成骨細(xì)胞在體外復(fù)合培養(yǎng)后組織相容性的變化。為異種骨修復(fù)骨損關(guān)節(jié)病的臨床應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：分別采用深低溫冷凍法、酶消化法和深低溫冷凍加酶消化法制備豬松質(zhì)骨材料。將實(shí)驗(yàn)分為A、B、C、D組。A組：新鮮豬骨組、B組：深低溫冷凍組、C組：酶消化組、D組：深低溫冷凍加酶消化組。分別采用蘇木素—伊紅染色和免疫組織化學(xué)的方法觀察各組材料的組織學(xué)特征及α-Gal抗原、MHC-Ⅰ抗原和MHC-Ⅱ抗原的性狀、分布及表達(dá)變化。并將不同方法制備的B、C、D組的豬松質(zhì)骨材料與兔成骨細(xì)胞進(jìn)行體外復(fù)合培養(yǎng),采用倒置相差顯微鏡、普通光學(xué)顯微鏡、掃描電鏡觀察兔成骨細(xì)胞在豬松質(zhì)骨材料中的黏附、生長及增殖特點(diǎn)。 結(jié)果：蘇木素—伊紅染色鏡下可見新鮮豬骨材料中廣泛分布骨陷窩、骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、大量的脂肪網(wǎng)架結(jié)構(gòu),內(nèi)含骨髓細(xì)胞。深低溫冷凍骨材料中含大量的骨陷窩,含少量的骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、骨髓細(xì)胞及脂肪網(wǎng)架結(jié)構(gòu)。酶消化骨材料中含大量骨陷窩,含極少量的骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞,骨髓腔中未見脂肪網(wǎng)架結(jié)構(gòu)。深低溫冷凍加酶消化骨材料中含大量骨陷窩,未見骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞,骨髓腔中未見脂肪網(wǎng)架結(jié)構(gòu)及骨髓細(xì)胞。免疫組化鏡下可見新鮮豬骨材料中α-Gal抗原、MHC-Ⅰ抗原廣泛表達(dá)在成骨細(xì)胞、骨髓細(xì)胞周圍,MHC-Ⅱ抗原表達(dá)在骨髓細(xì)胞周圍。深低溫冷凍組的骨基質(zhì)中含少量骨細(xì)胞殘留,少量的膜蛋白表面有α-Gal抗原、MHC-Ⅰ抗原和MHC-Ⅱ抗原表達(dá)。酶消化組中骨陷窩內(nèi)有少量骨細(xì)胞殘留,膜蛋白表面含少量MHC-Ⅰ抗原和MHC-Ⅱ抗原表達(dá),未見α-Gal抗原表達(dá)。深低溫冷凍加酶消化組中未見α-Gal抗原、MHC-Ⅰ抗原和MHC-Ⅱ抗原表達(dá)。不同方法制備的豬骨材料與兔成骨細(xì)胞體外復(fù)合培養(yǎng)后,倒置相差顯微鏡下可見兔成骨細(xì)胞在B、C、D三個(gè)組別豬骨材料表面都有生長,掃描電鏡下可見深低溫冷凍加酶消化的豬骨材料表面有大量的細(xì)胞黏附、生長、繁殖并形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞外形為星形、多邊形、多角形或短梭形,偽足交錯(cuò)呈網(wǎng)狀覆蓋骨材料孔隙表面。單純酶消化的骨材料表面成骨細(xì)胞呈短梭形并延骨小梁排列,相互融合成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的較少。深低溫冷凍的骨材料表面有少量細(xì)胞生長、黏附,且細(xì)胞生長不充分。 結(jié)論：深低溫冷凍加酶消化可以有效的去除異種抗原,而單純采用深低溫冷凍可以明顯的減少異種抗原,但是不能完全的去除異種抗原。單純采用酶消化法可以明顯的減少cc-Gal抗原表達(dá),但MHC-Ⅰ抗原和MHC-Ⅱ抗原不能完全去除。各組豬松質(zhì)骨材料與兔成骨細(xì)胞體外復(fù)合培養(yǎng)后觀察到深低溫冷凍加酶消化制備后的骨材料在組織相容性方面優(yōu)于單純的深低溫冷凍和單純的酶消化法制備的骨材料。
[Abstract]:Objective: to observe the effect of porcine cancellous bone materials prepared by different methods on the distribution and expression of xenogeneic antigens. To study the changes of histocompatibility of porcine cancellous bone materials prepared by different methods and osteoblasts derived from newborn rabbits after co-culture in vitro, and to provide a certain experimental basis for the clinical application of heterogenous bone in repairing osteoarthropathy. Methods: porcine cancellous bone materials were prepared by deep cryopreservation, enzyme digestion and deep cryopreservation plus enzyme digestion. Group B: deep hypothermia freezing group: group C: enzyme digestion group. Group D: deep cryopreservation plus enzyme digestion group. The histological characteristics and 偽 -Gal antigen of each group were observed by hematoxylin eosin staining and immunohistochemistry. The characters, distribution and expression of MHC- 鈪，

本文編號(hào)：1441318