本文關(guān)鍵詞：高致病性禽流感H5N1 NP蛋白與NIK蛋白相互作用初步研究　出處：《軍事醫(yī)學(xué)》2017年04期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 禽流感 流感病毒A型 HN亞型 核蛋白 NF-κB誘導(dǎo)激酶 蛋白質(zhì)相互作用

【摘要】：目的研究高致病性禽流感H5N1(A/goose/Jilin/hb/2003)核蛋白(NP)與NF-κB誘導(dǎo)激酶(NIK)是否存在蛋白質(zhì)相互作用,探討H5N1 NP對NIK誘導(dǎo)的NF-κB轉(zhuǎn)錄活性的影響。方法從人宮頸癌細胞系He La細胞的總RNA中經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄和PCR獲得NIK的全長cDNA雙鏈片段,分別以其和pcDNA3-Flag-NP載體為模板,p CMVMyc-N和pGEX-4T-1為載體,構(gòu)建真核表達載體pCMV-Myc-NIK和原核表達載體pGEX-4T-1-NP(GST-NP),并通過免疫共沉淀及GST pull-down實驗檢測H5N1 NP和NIK之間是否存在相互作用,利用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測H5N1 NP對NIK誘導(dǎo)的NF-κB轉(zhuǎn)錄活性的影響。結(jié)果免疫共沉淀及GST pull-down實驗表明,構(gòu)建的真核表達載體pCMV-Myc-NIK和原核表達載體pGEX-4T-1-NP(GST-NP)均能正確表達,H5N1 NP與NIK之間存在相互作用;報告基因結(jié)果顯示,H5N1 NP蛋白能明顯抑制NIK誘導(dǎo)的NF-κB轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)論 H5N1 NP與NIK之間存在蛋白質(zhì)相互作用,并抑制NIK誘導(dǎo)的NF-κB轉(zhuǎn)錄活性,為進一步研究H5N1的致病機制打下基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to study the nucleoprotein (NPN) and NF- 魏 B induced kinase (NIKK) of the highly pathogenic avian influenza A / A / J / J / J / J / 2003 nuclear protein (NPN) and NF- 魏 B induced kinases (NIKs). Whether there is a protein interaction. To investigate the effect of H5N1 NP on NF- 魏 B transcriptional activity induced by NIK. The full-length cDNA double strand fragment of NIK was obtained from the total RNA of La cells by reverse transcription and PCR. Its and pcDNA3-Flag-NP carriers were used as template CMVMyc-N and pGEX-4T-1 as carriers, respectively. The eukaryotic expression vector pCMV-Myc-NIK and the prokaryotic expression vector pGEX-4T-1-NPGST-NPwere constructed. The interaction between H5N1 NP and NIK was detected by immunoprecipitation and GST pull-down assay. Double luciferase reporter gene system was used to detect the effect of H5N1 NP on NF- 魏 B transcriptional activity induced by NIK. The constructed eukaryotic expression vector pCMV-Myc-NIK and prokaryotic expression vector pGEX-4T-1-NPGST-NP) can be expressed correctly. There was interaction between H5N1 NP and NIK. The results of the reporter gene showed that the H5N1 NP protein could significantly inhibit the NF- 魏 B transcriptional activity induced by NIK. Conclusion there is a protein interaction between H5N1 NP and NIK. The inhibition of NF- 魏 B transcriptional activity induced by NIK provides a basis for further study on the pathogenesis of H5N1.
【作者單位】： 安徽大學(xué)健康科學(xué)研究院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(31400046)
【分類號】：R373.1
【正文快照】： 禽流感是由A型禽流感病毒(influenza A virus,IAV)引起的一種高度接觸性急性傳染病,對養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展以及人類公共衛(wèi)生具有嚴重危害。由于缺乏有效的預(yù)防和治療手段,禽流感H5N1病毒已成為威脅全球健康的長期隱患。IAV屬于正黏病毒科(Orthomyxoviridae),其基因組由8條負義單鏈RNA

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4 劉U，

本文編號：1435336