本文關(guān)鍵詞：人源化抗人TNFα單克隆抗體純化工藝的優(yōu)化　出處：《沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)》2017年01期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的考察中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(Chinese hamster ovary,CHO細(xì)胞)表達(dá)的人源化抗人TNFα單克隆抗體的親和色譜過(guò)程中的雜質(zhì)洗脫工藝,優(yōu)化目的蛋白洗脫工藝條件。方法以目的蛋白回收率和宿主細(xì)胞蛋白殘留量為評(píng)價(jià)指標(biāo),篩選最佳的雜質(zhì)洗脫緩沖液;利用實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法,以純度、洗脫峰pH值、宿主細(xì)胞蛋白殘留量為評(píng)價(jià)指標(biāo),考察目的蛋白洗脫緩沖液的pH值和濃度對(duì)工藝的影響,優(yōu)化目的蛋白洗脫工藝條件。結(jié)果優(yōu)化后的親和色譜工藝,在保持目的蛋白高回收率(優(yōu)化前為86.5%,優(yōu)化后為86.7%)的同時(shí),可顯著降低目的蛋白洗脫峰中宿主細(xì)胞蛋白殘留量(由1 218×10-6降低至78×10-6),提高目的蛋白純度(優(yōu)化前為95.5%,優(yōu)化后為96.6%),減輕后續(xù)純化壓力;提高了目的蛋白洗脫峰的pH值(由3.59提高到4.25),有利于目的蛋白的穩(wěn)定。結(jié)論優(yōu)化了人源化抗人TNFα單克隆抗體的親和色譜工藝,本工藝有效、可行。
[Abstract]:Objective to investigate the China hamster ovary cells (Chinese hamster ovary, CHO cells) expression of humanized alpha impurities of anti human TNF monoclonal antibody affinity chromatography in the elution process, optimize elution conditions. Methods to recovery of protein and host cell protein residues as the evaluation index, select the best impurity elution buffer the use of liquid; experimental design method, the purity of elution peak value of pH, host cell protein residues as the evaluation index, the effects of elution buffer pH and concentration of technology, optimization objective protein elution conditions. Affinity chromatography process optimized results, while maintaining the target protein with high recovery rate (optimization of 86.5% before and after optimization is 86.7%) at the same time, can significantly reduce the elution of residual host cell protein peaks (from 1218 down to 78 * 10-6 * 10-6), to improve the purity of target protein (before optimization is 95.5%, after optimization is 96.6%), reduce the pressure to improve subsequent purification; protein elution peak value of pH (from 3.59 to 4.25), is favorable to protein stability. Conclusion the affinity chromatography process optimization of humanized monoclonal antibody against human TNF, this technology is effective and feasible.

【作者單位】： 沈陽(yáng)藥科大學(xué)生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院;沈陽(yáng)三生制藥有限責(zé)任公司;
【分類號(hào)】：R392.11
【正文快照】： 腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNFα)是與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克羅恩病、銀屑病及強(qiáng)直性脊髓炎等多種自身免疫病密切相關(guān)的重要炎癥因子[1-2],人腫瘤壞死因子α(h TNFα)中和抗體被認(rèn)為是目前治療這些疾病最有效的藥物之一[3]。典型的單克隆抗體純化方法一般為三

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