本文關(guān)鍵詞：冷應(yīng)激對大鼠血管平滑肌細胞鈣通道表達的影響　出處：《南昌大學》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關(guān)文章： 寒冷 血壓 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng) 平滑肌細胞 鈣離子通道

【摘要】：目的： 觀察大鼠及體外培養(yǎng)的大鼠血管平滑肌細胞(VSMC)暴露于低溫條件并持續(xù)不同時間后，血壓及血管平滑肌細胞上鈣通道α1C亞基表達的變化。 方法： ①動物分組及冷應(yīng)激高血壓模型的建立：選用健康成年SD大鼠24只，體重150-180克，完全隨機分為對照組和實驗組，實驗組又分為2、4、6周組，每組6只。對照組大鼠在室溫下（25±1℃）飼養(yǎng)；實驗組大鼠每天置于（4±1）℃、相對濕度為70%的氣候箱中4小時，2、4、6周組大鼠接受寒冷刺激時間分別為持續(xù)2、4、6周；血壓測量：于實驗兩周前開始測量血壓，每周3次，每次在大鼠安靜狀態(tài)測量，讀數(shù)5次，取其平均值；大鼠主動脈VSMC的分離及應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測主動脈鈣離子通道α1C亞基的表達：腹腔麻醉后將SD大鼠處死，取出胸主動脈，游離出血管中膜，剪成小塊，在RNA提取試劑Trizol中充分勻漿。根據(jù)試劑盒的說明進行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)，半定量檢測主動脈鈣離子通道α1C亞基的表達。 ②貼壁法培養(yǎng)大鼠主動脈VSMC。將細胞暴露低溫(4±1)℃，分別暴露2、4、6小時。應(yīng)用流式檢測各組VSMC內(nèi)鈣離子濃度及半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測各組VSMC鈣離子通道α1C亞基mRNA的表達。 結(jié)果： 1.大鼠的收縮壓變化：在冷應(yīng)激環(huán)境中大鼠血壓升高。實驗組大鼠血壓從第2周開始升高，2周冷應(yīng)激大鼠模型血壓為（102.8±2.25）mmHg，，對照組大鼠血壓為（89.16±3.73）mmHg，兩組相比有顯著統(tǒng)計學差異（p0.05）；第4、6周冷應(yīng)激大鼠模型血壓分別為（114.53±4.21）mmHg、(121.94±3.03)mmHg，與對照組相比有顯著統(tǒng)計學差異（p0.01）。 2.寒冷暴露組血管平滑肌鈣離子通道α1C亞基mRNA水平變化：與對照組相比，暴露組大鼠主動脈血管平滑肌鈣離子通道α1CmRNA的表達從第2周開始增加，到第6周達到最高，對照組鈣離子通道α1C亞基mRNA的相對表達量為（0.13±0.02），2、4、6周冷應(yīng)激大鼠模型鈣離子通道α1C亞基mRNA的相對表達量分別為（0.21±0.02）、（0.33±0.05）、（0.57±0.08），與對照組相比有顯著統(tǒng)計學差異（p0.01）。 3.鈣通道α1C亞基mRNA相對表達量與血壓的有顯著相關(guān)性：大鼠主動脈血管平滑肌鈣離子通道α1CmRNA相對表達量和寒冷暴露后大鼠血壓變化運用SPSS13.0軟件進行相關(guān)分析（Pearson分析），相關(guān)系數(shù)為0.86（p0.01）。 4.倒置相差顯微鏡下觀察VSMC為梭形、長梭形，排列成放射狀，呈典型“谷”與“峰”生長現(xiàn)象，陽性率在95%以上。 5.寒冷暴露的主動脈VSMC鈣離子濃度的變化：與對照組相比，冷刺激大鼠主動脈血管平滑肌細胞內(nèi)鈣離子濃度增高，且具有統(tǒng)計學差異（對照組：42.68±8.92nmol/L，寒冷暴露2小時組86.81±9.87nmol/L，寒冷暴露4小時組135.76±10.46nmol/L，寒冷暴露6小時組184.59±11.52nmol/L）。隨著冷刺激時間的延長，血管平滑肌內(nèi)的鈣離子濃度不斷增加，兩兩比較差異明顯（P0.05）。 6.寒冷暴露組血管平滑肌細胞鈣離子通道α1C亞基的mRNA表達增加，對照組鈣離子通道α1C亞基的mRNA為（0.42±0.03），分別暴露2、4、6小時的血管平滑肌細胞鈣離子通道α1C亞基的mRNA分別為（0.49±0.04）（、0.58±0.06）、（0.75±0.08），與對照組相比有顯著統(tǒng)計學差異（p0.01）。 結(jié)論： 1.寒冷環(huán)境的刺激可致大鼠血壓應(yīng)激性升高。 2.寒冷可致大鼠主動脈平滑肌細胞鈣離子濃度升高。 3.寒冷致大鼠主動脈平滑肌細胞膜鈣通道α1C亞基mRNA水平升高進而提示平滑肌細胞鈣離子濃度增高是產(chǎn)生大鼠血壓升高的可能病理基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective:
Objective To observe the changes of blood pressure and the expression of calcium channel alpha 1C subunits in vascular smooth muscle cells (VSMC) exposed to low temperature for a long time in rats and in vitro.
Method錛

本文編號：1433826