本文關(guān)鍵詞：冷應(yīng)激對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞鈣通道表達(dá)的影響　出處：《南昌大學(xué)》2012年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 寒冷 血壓 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng) 平滑肌細(xì)胞 鈣離子通道

【摘要】：目的： 觀察大鼠及體外培養(yǎng)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)暴露于低溫條件并持續(xù)不同時(shí)間后，血壓及血管平滑肌細(xì)胞上鈣通道α1C亞基表達(dá)的變化。 方法： ①動(dòng)物分組及冷應(yīng)激高血壓模型的建立：選用健康成年SD大鼠24只，體重150-180克，完全隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組又分為2、4、6周組，每組6只。對(duì)照組大鼠在室溫下（25±1℃）飼養(yǎng)；實(shí)驗(yàn)組大鼠每天置于（4±1）℃、相對(duì)濕度為70%的氣候箱中4小時(shí)，2、4、6周組大鼠接受寒冷刺激時(shí)間分別為持續(xù)2、4、6周；血壓測(cè)量：于實(shí)驗(yàn)兩周前開(kāi)始測(cè)量血壓，每周3次，每次在大鼠安靜狀態(tài)測(cè)量，讀數(shù)5次，取其平均值；大鼠主動(dòng)脈VSMC的分離及應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)主動(dòng)脈鈣離子通道α1C亞基的表達(dá)：腹腔麻醉后將SD大鼠處死，取出胸主動(dòng)脈，游離出血管中膜，剪成小塊，在RNA提取試劑Trizol中充分勻漿。根據(jù)試劑盒的說(shuō)明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)，半定量檢測(cè)主動(dòng)脈鈣離子通道α1C亞基的表達(dá)。 ②貼壁法培養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈VSMC。將細(xì)胞暴露低溫(4±1)℃，分別暴露2、4、6小時(shí)。應(yīng)用流式檢測(cè)各組VSMC內(nèi)鈣離子濃度及半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)各組VSMC鈣離子通道α1C亞基mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1.大鼠的收縮壓變化：在冷應(yīng)激環(huán)境中大鼠血壓升高。實(shí)驗(yàn)組大鼠血壓從第2周開(kāi)始升高，2周冷應(yīng)激大鼠模型血壓為（102.8±2.25）mmHg，，對(duì)照組大鼠血壓為（89.16±3.73）mmHg，兩組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p0.05）；第4、6周冷應(yīng)激大鼠模型血壓分別為（114.53±4.21）mmHg、(121.94±3.03)mmHg，與對(duì)照組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p0.01）。 2.寒冷暴露組血管平滑肌鈣離子通道α1C亞基mRNA水平變化：與對(duì)照組相比，暴露組大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌鈣離子通道α1CmRNA的表達(dá)從第2周開(kāi)始增加，到第6周達(dá)到最高，對(duì)照組鈣離子通道α1C亞基mRNA的相對(duì)表達(dá)量為（0.13±0.02），2、4、6周冷應(yīng)激大鼠模型鈣離子通道α1C亞基mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為（0.21±0.02）、（0.33±0.05）、（0.57±0.08），與對(duì)照組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p0.01）。 3.鈣通道α1C亞基mRNA相對(duì)表達(dá)量與血壓的有顯著相關(guān)性：大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌鈣離子通道α1CmRNA相對(duì)表達(dá)量和寒冷暴露后大鼠血壓變化運(yùn)用SPSS13.0軟件進(jìn)行相關(guān)分析（Pearson分析），相關(guān)系數(shù)為0.86（p0.01）。 4.倒置相差顯微鏡下觀察VSMC為梭形、長(zhǎng)梭形，排列成放射狀，呈典型“谷”與“峰”生長(zhǎng)現(xiàn)象，陽(yáng)性率在95%以上。 5.寒冷暴露的主動(dòng)脈VSMC鈣離子濃度的變化：與對(duì)照組相比，冷刺激大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增高，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（對(duì)照組：42.68±8.92nmol/L，寒冷暴露2小時(shí)組86.81±9.87nmol/L，寒冷暴露4小時(shí)組135.76±10.46nmol/L，寒冷暴露6小時(shí)組184.59±11.52nmol/L）。隨著冷刺激時(shí)間的延長(zhǎng)，血管平滑肌內(nèi)的鈣離子濃度不斷增加，兩兩比較差異明顯（P0.05）。 6.寒冷暴露組血管平滑肌細(xì)胞鈣離子通道α1C亞基的mRNA表達(dá)增加，對(duì)照組鈣離子通道α1C亞基的mRNA為（0.42±0.03），分別暴露2、4、6小時(shí)的血管平滑肌細(xì)胞鈣離子通道α1C亞基的mRNA分別為（0.49±0.04）（、0.58±0.06）、（0.75±0.08），與對(duì)照組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p0.01）。 結(jié)論： 1.寒冷環(huán)境的刺激可致大鼠血壓應(yīng)激性升高。 2.寒冷可致大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞鈣離子濃度升高。 3.寒冷致大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞膜鈣通道α1C亞基mRNA水平升高進(jìn)而提示平滑肌細(xì)胞鈣離子濃度增高是產(chǎn)生大鼠血壓升高的可能病理基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective:
Objective To observe the changes of blood pressure and the expression of calcium channel alpha 1C subunits in vascular smooth muscle cells (VSMC) exposed to low temperature for a long time in rats and in vitro.
Method錛

本文編號(hào)：1433826