本文關(guān)鍵詞：生長分化因子11對小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞系HT22增殖與分化的影響　出處：《中國輸血雜志》2017年04期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 生長分化因子 HT細(xì)胞 增殖分化 轉(zhuǎn)化生長因子β/Smad/ 環(huán)磷酸腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白Creb Notch

【摘要】：目的分析生長分化因子11(GDF11)在體外對小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞系HT22增殖、分化的影響,探討GDF11對神經(jīng)細(xì)胞的作用機制。方法用完全培養(yǎng)基(含5%馬血清、10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基)將小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞系HT22在37℃和5%CO_2條件下培養(yǎng)過夜后,更換為饑餓培養(yǎng)基(含1%胎牛血清和0.5%馬血清的高糖DMEM)繼續(xù)培養(yǎng)6 h后,分為實驗組:棄去原有培養(yǎng)基,加入含有不同濃度GDF11(12.5、25、50、100 ng/m L)的饑餓培養(yǎng)基培養(yǎng)6、24或48 h;對照組:棄去原有培養(yǎng)基,加入與實驗組相同體積的饑餓培養(yǎng)基培養(yǎng)6、24或48 h。采用增強型CCK8法檢測細(xì)胞活力及增殖情況,通過實時定量PCR(qRT-PCR)檢測細(xì)胞周期蛋白Cycling D2、神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志蛋白Nestin、神經(jīng)元標(biāo)志蛋白βⅢ-Tubulin、星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白GFAP及表皮生長因子受體EGFR、Notch1等信號通路蛋白的mRNA表達(dá)情況,通過Western blot方法分析GDF11對HT22細(xì)胞的Smad2/3、環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白Creb等蛋白的磷酸化的影響。結(jié)果處理24 h,實驗組HT22細(xì)胞活力與對照組相近(P0.05);處理48 h,25ng/m L r GDF11實驗組與對照組細(xì)胞活力(%)為74.50!1.45 vs 69.17!0.73(P0.05),其他實驗組(r GDF11濃度分別為12.5、50和100 ng/m L)細(xì)胞增殖與對照組比較無明顯差別(P0.05)。qRT-PCR檢測:實驗組βⅢ-Tubulin基因表達(dá)上調(diào)明顯(P0.01),且有劑量依賴性;Nestin基因表達(dá)下調(diào)(P0.05);GFAP基因表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05);Cycling D2基因、EGFR基因和Notch1基因表達(dá)均明顯下調(diào)(P0.05)。Western blot分析:實驗組Smad2/3蛋白和Creb蛋白的磷酸化與對照組相比明顯上調(diào)(P0.05)。結(jié)論 GDF11可能通過抑制Notch、EGFR信號通路,激活TGF-β、CREB信號通路等抑制小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞系HT22的增殖、促進其向神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞的分化。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of growth differentiation factor (GDF 11) on the proliferation and differentiation of mouse hippocampal neural cell line HT22 in vitro. To explore the mechanism of GDF11 on nerve cells. Methods complete culture medium (containing 5% horse serum) was used. 10% fetal bovine serum on high sugar DMEM medium) the mouse hippocampal nerve cell line HT22 was cultured overnight at 37 鈩，

本文編號：1432434