本文關(guān)鍵詞：多功能p100蛋白對細(xì)胞周期的調(diào)控機(jī)制研究　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：研究目的：細(xì)胞周期是細(xì)胞生命活動的基本特征。細(xì)胞通過周期時相的變遷完成個體的發(fā)育和自我的更新,其核心內(nèi)容為DNA的復(fù)制以及相關(guān)蛋白時序性的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。p100蛋白是一種多功能蛋白,不但可以作為轉(zhuǎn)錄共激活因子,與若干轉(zhuǎn)錄因子相互作用激活轉(zhuǎn)錄；在轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控中,p100蛋白通過參與pre-mRNA剪接,RNAi等環(huán)節(jié)發(fā)揮重要作用；p100蛋白還與和細(xì)胞周期密切相關(guān)的核仁存在共定位現(xiàn)象；另外,在一些臨床疾病的研究中,發(fā)現(xiàn)p100在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色。鑒于兩者均與基因轉(zhuǎn)錄、pre-mRNA剪接加工、核仁以及腫瘤的發(fā)生密切相關(guān),我們推測p100蛋白有可能參與細(xì)胞周期的調(diào)控,從而對細(xì)胞的生物學(xué)行為產(chǎn)生影響。本文旨在研究p100對細(xì)胞周期的影響,進(jìn)而探討其調(diào)控細(xì)胞周期的分子機(jī)制。 方法：本課題分三部分進(jìn)行,第一部分研究不同細(xì)胞群中p100的表達(dá)。該部分主要從兩方面研究,一方面,采用細(xì)胞分離技術(shù),于白膜中分離淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞,檢測兩種細(xì)胞群中p100的表達(dá)情況；另一方面,取不同的組織,觀察不同增殖能力的細(xì)胞群間p100的表達(dá)差異。第二部分,改變p100的表達(dá)水平,研究p100對細(xì)胞周期分布及同步化釋放后再分布的影響,同時檢測細(xì)胞周期調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中其他周期蛋白的變化,探討其調(diào)控細(xì)胞周期的分子機(jī)制。第三部分,采用細(xì)胞同步化技術(shù),研究p100在不同細(xì)胞周期的特點。該部分主要從三方面研究,第一通過WB與PCR技術(shù)檢測p100在不同周期時相的表達(dá)；第二采用免疫沉淀技術(shù),檢測不同周期p100蛋白的修飾；第三采用免疫熒光技術(shù)觀察不同周期p100的胞內(nèi)定位。 結(jié)果：①淋巴細(xì)胞中p100高表達(dá),粒細(xì)胞中p100低表達(dá)； ②增殖細(xì)胞群(G1期細(xì)胞)腫瘤細(xì)胞中,p100高表達(dá)；暫不增殖細(xì)胞群(GO期細(xì)胞)肝、脾、腎組織中,p100高表達(dá)；終末細(xì)胞群粒細(xì)胞、肌細(xì)胞、神經(jīng)組織中,p100低表達(dá)。 ③抑制p100表達(dá),G1期細(xì)胞比例增加,S期細(xì)胞比例降低；過表達(dá)p100,G1期細(xì)胞比例降低,S期細(xì)胞比例增加。 ④抑制p100表達(dá),將細(xì)胞由G1/S交界期及G2/M期釋放,與對照組及過表達(dá)組相比,細(xì)胞重新進(jìn)入細(xì)胞周期的速度減慢。 ⑤將細(xì)胞同步化于不同周期,發(fā)現(xiàn)p100蛋白可表達(dá)于細(xì)胞周期各個階段,以G1/S期表達(dá)水平較低； ⑥通過免疫沉淀富集p100蛋白,檢測其磷酸化水平,結(jié)果顯示當(dāng)細(xì)胞阻滯于G1/S期,p100蛋白磷酸化水平明顯降低。 ⑦免疫熒光觀察,p100蛋白在不同周期狀態(tài)下的分布呈現(xiàn)動態(tài)變化,與核仁在細(xì)胞周期的分布相一致。 結(jié)論：①在細(xì)胞周期活躍的細(xì)胞群中,p100高表達(dá)；在終末期細(xì)胞群中,p100低表達(dá)。說明p100蛋白與細(xì)胞周期特性密切相關(guān)。 ②p100蛋白可促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程,且主要是促進(jìn)G1期向S期的周期進(jìn)程。 ③p100蛋白可表達(dá)于細(xì)胞周期各個階段,以G1/S期表達(dá)水平較低,且磷酸化水平明顯降低。進(jìn)一步說明p100對細(xì)胞周期的調(diào)控發(fā)生在G1/S期,提示p100可能通過磷酸化狀態(tài)的改變發(fā)揮作用。 ④p100蛋白在不同周期時相的分布呈動態(tài)變化,與核仁的周期分布相一致。提示p100蛋白可能與核仁協(xié)同作用參與核糖體的形成,調(diào)控細(xì)胞周期。
[Abstract]:Research purposes : The cell cycle is the basic feature of cell life activities . The development and self - renewal of the individual is accomplished by the change of phase in the cycle . The core content of p100 protein plays an important role in the replication of DNA and the transcriptional expression of related proteins . In the post - transcriptional regulation , p100 protein plays an important role in the development of tumor . In addition , in the study of transcriptional regulation , p100 protein plays an important role in the development of tumor . In addition , it is speculated that p100 protein may participate in the regulation of cell cycle , thus affecting the biological behavior of the cell . The purpose of this paper is to study the effect of p100 on cell cycle and to further explore its molecular mechanism for regulating cell cycle . Methods : The expression of p100 in different cell populations was studied in the first part . On the one hand , the expression of p100 in different cell populations was studied by means of cell separation technique . On the other hand , the expression level of p100 was detected by means of cell separation technique . Results : 鈶，

本文編號：1413364