本文關(guān)鍵詞：梅毒螺旋體Tp0259假定蛋白的原核表達(dá)、純化及活性研究　出處：《中國病原生物學(xué)雜志》2017年02期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 梅毒螺旋體 梅毒 Tp 重組抗原 免疫反應(yīng)性

【摘要】：目的表達(dá)、純化梅毒螺旋體(Tp)重組蛋白Tp0259(rTp0259),鑒定其免疫原性,并探討其在梅毒血清診斷中的價值。方法 PCR擴(kuò)增tp0259基因,構(gòu)建pET-28a(+)/Tp0259原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化至E.coli BL21中誘導(dǎo)表達(dá)。采用Ni-NTA親和層析法純化重組蛋白,并進(jìn)行Western blot鑒定。以重組蛋白Tp0259為抗原,采用Western blot方法檢測梅毒患者血清(一期梅毒患者血清21份,二期梅毒患者血清13份,潛伏梅毒患者血清6份,并與梅毒診斷金標(biāo)準(zhǔn)比較)。結(jié)果 PCR擴(kuò)增獲得600bp左右大小的目的基因片段并成功構(gòu)建原核表達(dá)載體pET28a-Tp0259,經(jīng)誘導(dǎo)高效表達(dá)分子質(zhì)量單位為28ku的重組蛋白。Western blot證實(shí)該重組蛋白為Tp0259假定蛋白,能被梅毒患者血清識別。以Tp0259為抗原采用Western blot檢測梅毒患者血清特異性抗體結(jié)果與梅毒診斷金標(biāo)準(zhǔn)(臨床癥狀、病史結(jié)合血清學(xué)診斷方法)間的κ值為0.944,表明這兩種方法檢測結(jié)果的一致性較好。結(jié)論成功表達(dá)、純化了可溶性rTp0259,該蛋白具有良好的免疫反應(yīng)性并具有較高的血清學(xué)診斷價值。
[Abstract]:Objective to express and purify the recombinant protein Tp0259rTp0259 from Treponema pallidum and identify its immunogenicity. Methods the tp0259 gene was amplified by PCR and the prokaryotic expression vector pET-28awas constructed. The recombinant protein was purified by Ni-NTA affinity chromatography. The recombinant protein Tp0259 was used as antigen to detect 21 sera of syphilis patients by Western blot method. There were 13 sera for secondary syphilis and 6 for latent syphilis. Results the target gene fragment of about 600bp was obtained by PCR amplification and the prokaryotic expression vector pET28a-Tp0259 was constructed successfully. The recombinant protein with a molecular weight unit of 28 ku was highly expressed. Western blot confirmed that the recombinant protein was assumed to be a Tp0259 protein. Using Tp0259 as antigen, Western blot was used to detect the serum specific antibody of syphilis patients and the diagnostic gold standard for syphilis (clinical symptoms). The 魏 value between the two methods was 0.944, which indicated that the two methods were in good agreement. Conclusion the soluble rTp0259 was successfully expressed and purified. The protein has good immunoreactivity and high serological diagnostic value.
【作者單位】： 南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科;南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)研究所特殊病原體防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院消化內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81471576) 湖南省分子靶標(biāo)與新藥物研究協(xié)同創(chuàng)新中心項(xiàng)目(No.2015-351) 特殊病原體防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目(No.2014-5) 湖南省科技廳一般項(xiàng)目(No.2014TT2025)
【分類號】：R377.1
【正文快照】： *?**?梅毒是由梅毒螺旋體(Treponema　pallidum,Tp)感染引起的一種性傳播疾病。目前,梅毒血清學(xué)檢查仍然是梅毒診斷的重要依據(jù)。在過去幾十年,性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(VDRL)、快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)(RPR)、梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)和熒光密螺旋體抗體吸收試驗(yàn)(FTA-ABS)等方法已

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