本文關(guān)鍵詞：Rab21通過促進(jìn)EGFR降解負(fù)調(diào)控EGF激活的MAPK信號(hào)通路　出處：《清華大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： Rab21 EGFR 降解 內(nèi)吞 MAPK信號(hào)通路

【摘要】：表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR或者ErbB1）屬于ErbB受體家族，是一類具有酪氨酸激酶活性的膜受體，，它在細(xì)胞的增殖、分化、遷移、粘附及凋亡等多種重要的生命進(jìn)程中起重要作用。因此EGFR受體必須受到精確的調(diào)控以確保體內(nèi)生理活動(dòng)的正常進(jìn)行，而配體介導(dǎo)的細(xì)胞表面受體快速內(nèi)吞即是EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的一種重要調(diào)控機(jī)制。在這一過程中，多種磷酸化蛋白、泛素化蛋白和內(nèi)吞體膜上的蛋白協(xié)同作用，已有研究表明Rab蛋白作為一類通過招募特異效應(yīng)分子控制囊泡識(shí)別轉(zhuǎn)運(yùn)的小G蛋白能夠參與到EGFR的內(nèi)吞轉(zhuǎn)運(yùn)中。 為了進(jìn)一步闡明Rab蛋白通過內(nèi)吞作用調(diào)控信號(hào)傳導(dǎo)的分子機(jī)制，本論文通過在HEK293T細(xì)胞和HeLa細(xì)胞中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)Rab21蛋白的質(zhì)粒和一系列生物化學(xué)和分子生物學(xué)的研究方法，深入探究了小G蛋白R(shí)ab21對(duì)EGFR內(nèi)吞和降解及其下游信號(hào)通路的影響。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證明Rab21和EGFR之間存在相互作用，同時(shí)，細(xì)胞免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)說明Rab21與內(nèi)吞的EGFR共定位。另外，細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)證明Rab21能夠改變細(xì)胞內(nèi)EGFR的分布狀態(tài)，促進(jìn)EGFR內(nèi)吞。進(jìn)一步研究揭示Rab21能夠促進(jìn)EGF非依賴和EGF依賴兩種模式下的EGFR降解。此外，磷酸化ERK水平的檢測(cè)和熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)均表明Rab21能夠下調(diào)EGF介導(dǎo)的MAPK信號(hào)通路。 綜上所述，Rab21能夠通過促進(jìn)EGFR降解和內(nèi)吞抑制EGF介導(dǎo)的MAPK信號(hào)通路。這為深刻理解配體介導(dǎo)的受體內(nèi)吞這一經(jīng)典負(fù)反饋調(diào)控過程的分子機(jī)制提供了有力證據(jù)。
[Abstract]:Epidermal growth factor receptor (EGFR) or ErbB1) belongs to the ErbB receptor family. It is a kind of membrane receptor with tyrosine kinase activity. It proliferates, differentiates and migrates in cells. Adhesion and apoptosis play an important role in many important life processes. Therefore, EGFR receptors must be precisely regulated to ensure normal physiological activities in vivo. Ligand-mediated rapid endocytosis of cell surface receptors is an important regulatory mechanism of EGFR signal transduction. In this process, many phosphorylated proteins, ubiquitin proteins and proteins on endocytosis membrane act synergistically. It has been shown that Rab protein can participate in the endocytosis of EGFR as a kind of small G protein which can control vesicle recognition and transport by recruiting specific effector molecules. In order to further elucidate the molecular mechanism of Rab protein regulating signal transduction through endocytosis. In this paper, the transient transfection of plasmid expressing Rab21 protein in HEK293T cells and HeLa cells and a series of biochemical and molecular biological methods were carried out. The effects of small G protein Rab21 on the endocytosis and degradation of EGFR and its downstream signaling pathway were investigated. The results of immunoprecipitation showed that there was an interaction between Rab21 and EGFR, and at the same time. Cellular immunofluorescence staining showed that Rab21 was colocated with endocytosis EGFR. In addition, cellular immunofluorescence assay showed that Rab21 could change the distribution of EGFR in cells. Promote EGFR endocytosis. Further study revealed that Rab21 can promote the degradation of EGFR in EGF independent and EGF dependent modes. The detection of phosphorylated ERK and luciferase report showed that Rab21 could down-regulate the MAPK signaling pathway mediated by EGF. To sum up. Rab21 can inhibit MAPK signaling pathway mediated by EGF by promoting EGFR degradation and endocytosis. This provides a profound understanding of the molecular mechanism of ligand-mediated endocytosis, a classical negative feedback regulation process. There is strong evidence.
【學(xué)位授予單位】：清華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R341

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1407324