本文關鍵詞：LOX-1在C反應蛋白誘導人臍靜脈內皮細胞組織因子表達中的作用　出處：《重慶醫(yī)科大學》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體-1 C-反應蛋白 組織因子 血栓

【摘要】：目的：目前C反應蛋白（CRP）被認為是一種獨立、強烈的心血管疾病危險因素，，C反應蛋白能上調血管內皮細胞組織因子（TF）基因的表達。我們研究凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體-1（LOX-1）在C反應蛋白誘導人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)組織因子表達中的作用，以探討CRP在動脈血栓形成中可能的作用的。 方法：構建人重組質粒pTracer CMV2-CRP并將其轉染HUVECs細胞,RT-PCR、Western blot法鑒定CRP在HUVECs中轉錄水平及蛋白水平的表達。再用質粒pTracer CMV2-CRP轉染HUVECs細胞,分正常對照組、空質粒GFP組和CRP-GFP組（n=3），RT-PCR檢測LOX-1、TF的mRNA表達，Western blot檢測各組LOX-1、TF、P-ERK1/2、T-ERK1/2、P-JNK、T-JNK蛋白表達。CRP-GFP組分別加LOX-1阻斷劑、ERK1/2阻斷劑（U0126）、JNK阻斷劑（SP600125），Western blot檢測TF蛋白. 結果：在CRP質粒轉染的HUVEC細胞中發(fā)現綠色熒光蛋白及檢測到CRP的mRNA和蛋白表達。用表達人CRP的質粒轉染HUVECs顯著增加LOX-1mRNA和蛋白表達（0.70±0.03vs0.24±0.01,0.6616±0.0200vs0.2558±0.0400, P＜0.05）、TF的mRNA和蛋白表達(0.442±0.040vs0.146±0.030，0.7274±0.0200vs0.2174±0.0200,P＜0.05)。CRP激活了ERK1/2MAPK,未激活JNK MAPK。CRP上調TF表達被ERK1/2阻斷劑而非JNK阻斷劑阻斷.抗LOX-1的中和抗體顯著減少CRP誘導的TFmRNA和蛋白表達（0.264±0.030vs0.442±0.040,0.3244±0.0400vs0.7274±0.0200,P＜0.05）。 結論：構建的重組質粒成功轉染HUVEC細胞，CRP基因在CRP質粒轉染的HUVEC細胞中成功轉錄和翻譯。CRP誘導HUVECs細胞LOX-1表達上調，并通過LOX-1受體這一新途徑上調TF表達，且CRP通過ERK1/2MAPK信號途徑非JNK MAPK途徑上調了HUVEC細胞TF的表達。
[Abstract]:Objective : To investigate the role of lectin - like oxidized low - density lipoprotein receptor - 1 ( LOX - 1 ) in the expression of tissue factor ( TF ) in human umbilical vein endothelial cells induced by C - reactive protein . Methods : Human recombinant plasmid pTracer CMV2 - CRP was constructed . The expression of transcription level and protein level was determined by RT - PCR and Western blot . Results : The expression of mRNA and protein was detected in HUVEC transfected with CRP plasmid . The expression of LOX - 1mRNA and protein was significantly increased ( 0.70 鹵 0.03 vs 0.24 鹵 0.01 , 0.6616 鹵 0.0200 vs 0.2174 鹵 0.0200 , P < 0.05 ) . The expression of TF mRNA and protein was significantly decreased by the neutralizing antibody against LOX - 1 ( 0.264 鹵 0.030 vs 0.442 鹵 0.040 , 0.3244 鹵 0.0400vs0.7274 鹵 0.0200 , P < 0.05 ) . Conclusion : The recombinant plasmid constructed successfully transfected HUVEC cells and CRP gene was successfully transcribed and translated into HUVEC cells transfected with CRP plasmid . The expression of LOX - 1 in HUVEC induced by CRP was up - regulated and the expression of TF was up - regulated by the new pathway of LOX - 1 receptor .

【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R363

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本文編號：1405202