發(fā)布時間：2018-01-09 08:17

  本文關(guān)鍵詞：呼吸道合胞病毒重組融合蛋白F2的免疫原性研究　出處：《昆明理工大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：呼吸道合胞病毒是引起嬰幼兒下呼吸道感染的主要病原體,對嬰幼兒健康造成很大威脅。已研制的RSV疫苗在使用中常常會出現(xiàn)Th2型免疫極化現(xiàn)象和免疫病理損傷,本文將呼吸道合胞病毒F2蛋白與結(jié)核分枝桿菌ESAT-6蛋白在大腸桿菌中融合表達,并與LT佐劑共同免疫,誘導(dǎo)機體產(chǎn)生Th1/Th2平衡免疫反應(yīng)的同時,在呼吸道產(chǎn)生粘膜保護性抗體。 本論文將呼吸道合胞病毒F2蛋白與結(jié)核分枝桿菌ESAT-6蛋白的基因用PCR方法連接在一起,在大腸桿菌中經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,ESAT-6-F2和ESAT-6蛋白均以包涵體形式高效表達,分子量分別為21kDa和10kDa,免疫印跡法證明表達的蛋白為ESAT-6-F2和ESAT-6,尿素變性后用鎳離子親和層析法進行純化,純度均達到90%以上。最后通過梯度透析復(fù)性成功復(fù)性于PBS緩沖液中。 免疫共分5組,分別為：PBS組、LT組、ESAT-6組、ESAT-6-F2+LT組、ESAT-6-F2組,每組5只小鼠。實驗結(jié)果顯示,ESAT-6-F2+LT組、ESAT-6-F2組和ESAT-6組總IgG抗體效價比PBS高(P0.05),說明兩個蛋白免疫原性較好,都傾向于Th2型免疫反應(yīng),而LT佐劑的加入削弱了ESAT-6-F2蛋白的免疫極化現(xiàn)象。 同批免疫的小鼠末次免疫兩周后開始攻毒,連續(xù)三天,劑量為每天每只小鼠攻毒5×105pfu,以未攻毒小鼠作為空白對照。結(jié)果表明,攻毒后小鼠體重均大幅下降,ESAT-6-F2+LT組小鼠減重明顯少于PBS組,說明ESAT-6-F2蛋白與LT共同免疫,對小鼠產(chǎn)生一定的保護效果�？贵w檢測和肺部病理切片結(jié)果顯示,ESAT-6組Th2型免疫極化現(xiàn)象加劇,肺部病變嚴(yán)重,而ESAT-6-F2+LT誘導(dǎo)較為平衡的免疫應(yīng)答,肺部病變較輕,安全性較好。 本論文初步評價了ESAT-6-F2蛋白的免疫原性,為呼吸道合胞病毒疫苗研制奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Respiratory syncytial virus (RSV) is the main pathogen of infantile lower respiratory tract infection. The RSV vaccine that has been developed is often used in the use of Th2 type immune polarization phenomenon and immune pathological damage. In this paper, respiratory syncytial virus F2 protein and Mycobacterium tuberculosis ESAT-6 protein were expressed in E. coli and immunized with LT adjuvant. While inducing Th1/Th2 balanced immune response, mucosal protective antibodies were produced in respiratory tract. In this paper, the gene of respiratory syncytial virus F2 and ESAT-6 protein of Mycobacterium tuberculosis were linked together by PCR method and induced by IPTG in Escherichia coli. ESAT-6-F2 and ESAT-6 proteins were highly expressed in the form of inclusion bodies with molecular weight of 21kDa and 10kDa, respectively. The protein was identified as ESAT-6-F2 and ESAT-6 by Western blot and purified by nickel ion affinity chromatography after urea denaturation. The purity was above 90%. Finally, the renaturation was successfully refolded in PBS buffer by gradient dialysis. The immunized mice were divided into 5 groups respectively. The mice were divided into 5 groups: ESAT-6, ESAT-6-F2, ESAT-6-F2, respectively. The total IgG antibody titer of ESAT-6-F2 group and ESAT-6 group in ESAT-6-F2 LT group was higher than that in PBS group, indicating that the immunogenicity of the two proteins was better. LT adjuvant weakened the immune polarization of ESAT-6-F2 protein. The mice immunized with the same batch of mice began to attack the virus two weeks after the last immunization for three consecutive days. The dose was 5 脳 10 5 pfux per mouse per day. The mice without the virus were used as the blank control. The weight loss of ESAT-6-F2 LT group was significantly lower than that of PBS group, indicating that ESAT-6-F2 protein and LT co-immunized. The results of antibody detection and pathological section of lung showed that the Th2 type immunoreactive phenomenon in ESAT-6 group was aggravated and the lung lesion was serious. ESAT-6-F2 LT induced a more balanced immune response with mild pulmonary lesions and better safety. In this paper, the immunogenicity of ESAT-6-F2 protein was preliminarily evaluated, which laid a foundation for the development of respiratory syncytial virus vaccine.
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R392.1

【共引文獻】

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本文編號：1400657