本文關(guān)鍵詞：乳酸桿菌對(duì)LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞炎癥性細(xì)胞因子釋放的調(diào)節(jié)作用及可能機(jī)制　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 乳酸桿菌 THP-1細(xì)胞 炎性細(xì)胞因子 TNF-α NF-κB

【摘要】：背景:乳酸桿菌(Lactic Acid Bacteria)屬于腸道正常菌群,參與維持腸道微生態(tài)的平衡及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答。越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn),乳酸桿菌作為一種益生菌,具有多種免疫調(diào)節(jié)活性。它能夠增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷活性、促進(jìn)IgA的分泌、促進(jìn)DC的成熟、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分化和緩解炎癥等。此外,乳酸桿菌的細(xì)胞成分脂磷壁酸(LTA)、肽聚糖(PGN)、脂蛋白(LP)可以通過(guò)結(jié)合TLR2介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)乳酸桿菌的識(shí)別,而TLR2能夠分別與TLR1、TLR6結(jié)合形成異源二聚體,介導(dǎo)其對(duì)丙酰基LP、乙�；鵏P的識(shí)別,可能參與了乳酸桿菌刺激THP-1細(xì)胞的復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程。然而,乳酸桿菌發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的分子機(jī)制目前尚不明確。 目的:觀察副干酪乳酸桿菌(Lactobacillus paracasei,L.para)與嗜酸性乳酸桿菌(Lactobacillus acidophilus,L.acid)對(duì)LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞分泌TNF-α、IL-12P40、TGF-β的調(diào)節(jié)作用,并初步探討其分子機(jī)制。 方法:(1)先將THP-1細(xì)胞在佛波酯(PMA)的刺激作用下活化、分化為巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞,再進(jìn)行LPS誘生炎性細(xì)胞因子實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組、LPS處理組、單獨(dú)L.para處理組、L.para與LPS共處理組、單獨(dú)L.acid處理組及L.acid與LPS共處理組。提取上述各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的RNA組分,以RT-PCR法檢測(cè)THP-1細(xì)胞TNF-αmRNA水平的表達(dá),同時(shí),以ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α、IL-12P40和TGF-β水平的變化。(2)提取空白對(duì)照組、LPS處理組、單獨(dú)L.para處理組、L.para與LPS共處理組、單獨(dú)L.acid處理組及L.acid與LPS共處理組細(xì)胞的全蛋白,以Western Blot方法檢測(cè)胞內(nèi)未磷酸化及磷酸化IκB-α蛋白水平的表達(dá)。(3)細(xì)胞免疫熒光技術(shù)觀察NF-κB/P65的亞細(xì)胞定位,同時(shí),TransAM核蛋白定量分析法檢測(cè)THP-1細(xì)胞核內(nèi)NF-κB(P65/P50)的水平。 結(jié)果:(1)LPS能顯著刺激PMA誘導(dǎo)分化的THP-1細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-12P40和TGF-β;乳酸桿菌L.para及L.acid單獨(dú)作用時(shí)也能誘導(dǎo)細(xì)胞因子TNF-α和IL-12P40的產(chǎn)生,但L.para誘導(dǎo)的水平較低,而L.acid誘導(dǎo)的水平與LPS誘導(dǎo)水平相似,兩種乳酸桿菌對(duì)TGF-β的誘導(dǎo)水平則均顯著高于LPS;而當(dāng)兩菌分別與LPS共同作用于PMA誘導(dǎo)分化的THP-1細(xì)胞時(shí),都能顯著抑制LPS刺激細(xì)胞誘生的TNF-α和IL-12P40,并以L.para的抑制作用更明顯,但兩種細(xì)菌均對(duì)TGF-β沒(méi)有抑制作用,反而進(jìn)一步促進(jìn)其分泌。(2)LPS、L.para及L.acid單獨(dú)作用時(shí),均能使PMA誘導(dǎo)分化的THP-1細(xì)胞胞核磷酸化IκBα(p-IκBα)的水平增高、非磷酸化IκB-α水平降低,但L. para的作用相對(duì)較弱;而當(dāng)L.para或L.acid與LPS共同作用時(shí),則顯著抑制LPS刺激所誘導(dǎo)的IκB-α的磷酸化。(3)LPS、L.para及L.acid單獨(dú)作用時(shí),均能使PMA誘導(dǎo)分化的THP-1細(xì)胞核內(nèi)NF-κB(P65/P50)的水平增高,但L. para的作用相對(duì)較弱;而當(dāng)L.para或L.acid與LPS共同作用時(shí),則顯著抑制LPS刺激所誘導(dǎo)的NF-κB的核轉(zhuǎn)位作用。 結(jié)論:乳酸桿菌L. para、L.acid分別與LPS共同作用時(shí),均能通過(guò)抑制LPS刺激細(xì)胞所誘生的炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-12P40的水平而發(fā)揮炎癥調(diào)節(jié)作用,這一抑制作用的機(jī)制涉及抑制NF-κB信號(hào)通路。而且,乳酸桿菌的這一作用在不同菌種之間存在明顯差異。所以,L.para與L.acid的應(yīng)用對(duì)于預(yù)防潰瘍性結(jié)腸炎、Crohn’s腸病等炎癥性疾病的發(fā)生或緩解患者的炎癥狀況具有一定的臨床意義。
[Abstract]:Background : Lactic acid bacterium belongs to the normal flora of intestinal tract , participates in maintaining the balance of intestinal microecology and regulates the immune response of organism . More and more research has found that Lactobacillus is used as a kind of probiotics . It can enhance the killing activity of NK cells , promote the secretion of IgA , promote the maturation of DC , regulate T cell differentiation and alleviate inflammation . Objective : To observe the effect of Lactobacillus acidophilus ( L . para ) and Lactobacillus acidophilus ( L . acid ) on the secretion of TNF - 偽 , IL - 12P40 and TGF - 尾 in THP - 1 cells induced by LPS . Methods : ( 1 ) The expression of TNF - 偽 , IL - 12P40 and TGF - 尾 in the supernatant of THP - 1 cells was detected by ELISA . The expression of TNF - 偽 , IL - 12P40 and TGF - 尾 in the supernatant of THP - 1 cells was detected by RT - PCR . Results : ( 1 ) The levels of TNF - 偽 , IL - 12P40 and TGF - 尾 in THP - 1 cells induced by PMA were significantly inhibited by LPS . Conclusion : L . para and L . acid can play an important role in inhibiting the level of inflammatory cytokines TNF - 偽 , IL - 12P40 induced by LPS - stimulated cells .

【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R371

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1388266