發(fā)布時間：2018-01-06 08:20

  本文關鍵詞：細粒棘球蚴重組鐵蛋白和重組mMDH的免疫保護性差異機制的研究　出處：《寧夏醫(yī)科大學》2011年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 細粒棘球蚴 重組鐵蛋白抗原 重組線粒體蘋果酸脫氫酶 重組表達 免疫機制

【摘要】：目的通過對具有免疫保護力的重組鐵蛋白和不具有免疫保護力的重組mMDH蛋白的比較分析,從而找出小鼠被疫苗免疫后產生免疫保護和抗細粒棘球蚴的機制,為疫苗的廣泛應用提供理論依據(jù)。方法(1)實驗動物分組:選取雌性ICR小鼠隨機分為3組:rEg.ferritin免疫組、rEg.mMDH免疫組和對照組;(2)動物免疫:rEg.ferritin和rEg.mMDH免疫組小鼠分別注射10μg重組抗原+佐劑+PBS,100μl,共三次,每次間隔兩周,對照組注射100μl PBS;(3)動物攻擊感染:第3次免疫后2周,各組均以1500個活的原頭蚴/每只小鼠攻擊感染;(4)免疫保護力觀察:攻擊感染20周后剖殺小鼠,統(tǒng)計小鼠腹腔內包囊數(shù)量和直徑,計算免疫保護力。(5)脾細胞懸液的制備:剖殺小鼠,無菌取脾,分離脾細胞;(6)用分離得到的脾細胞,應用FCM檢測CD4~+和CD8~+T細胞亞群的百分比變化。(7)用MTT法檢測脾淋巴細胞增殖情況。(8)獲得數(shù)據(jù)后對具有免疫保護力和不具有免疫保護力的兩組進行對照比較,分析其內在機制。結果(1)根據(jù)Dempster公式計算:rEg.ferritin抗原免疫ICR小鼠可獲得86.37%的免疫保護力,而rEg.mMDH抗原免疫ICR小鼠未獲得免疫保護力,提示rEg.ferritin具有疫苗的潛質,而rEg.mMDH則無。(2)免疫組與對照組經統(tǒng)計學檢驗比較:①r Eg.ferritin免疫組小鼠在剖殺前CD4~+T細胞增加(P㩳0.01),CD8~+T細胞無明顯變化(P㧐0.05),而rEg.mMDH免疫組小鼠脾淋巴細胞亞群與對照組相比無明顯變化,提示rEg.ferritin免疫小鼠的保護機制有CD4~+T細胞的參與,CD8~+T細胞的作用不是很大;②MTT法檢測證實rEg.ferritin免疫的小鼠在rEg.ferritin刺激下脾淋巴細胞增殖水平明顯高于對照組(P0.01),而rEg.mMDH無明顯作用(P㧐0.05),提示rEg.ferritin抗原免疫小鼠的保護機制可能與其刺激脾淋巴細胞增殖有關。結論rEg.ferritin抗原誘導小鼠產生細胞免疫的保護機制可能與激活CD4~+T細胞,刺激脾淋巴細胞增殖有關,而rEg.mMDH抗原無免疫保護的機制可能與未激活CD4~+T細胞,未刺激脾淋巴細胞增殖有關。
[Abstract]:Objective through a comparative analysis on immune protection of the recombinant ferritin and do not have protective immunity of recombinant mMDH protein in mice, so as to find out the mechanism of immune protection caused by vaccine and anti Echinococcus, provide a theoretical basis for the widely used vaccine. Methods (1) experimental animal groups: female ICR mice were randomly selected divided into 3 groups: rEg.ferritin immune group, rEg.mMDH immune group and control group; (2) animal immunity: the rEg.ferritin and rEg.mMDH immunized mice were injected with 10 g recombinant antigen + adjuvant +PBS, 100 L, a total of three times, each time interval of two weeks, the control group was injected with 100 l PBS; (3) animal attack: third infection 2 weeks after immunization, each group are 1500 living protoscolices / per mouse against infection; (4) to observe the protective immunity against infection: 20 weeks after the mice were killed, the number and diameter of statistical intraperitoneal cyst, calculation of protective immunity (5). Spleen cell suspension was prepared, the mice were sacrificed and spleens from spleen cells; (6) with spleen cells isolated and detected by FCM CD4~+ and CD8~+T cell subsets percentage change. (7) MTT was used to detect the proliferation of spleen lymphocytes. (8) to obtain data on immune protection and two groups do not have protective immunity were compared, analysis of its internal mechanism. The results calculated according to Dempster formula (1): rEg.ferritin immunized ICR mice can get protective immunity in 86.37%, and rEg.mMDH antigen immune ICR mice did not get immune protection force, suggesting that rEg.ferritin has the potential of vaccines, and rEg.mMDH No. (2) comparison of immune group and control group were tested by the R Eg.ferritin immunized mice in killing CD4~+T cells before increased (P? 0.01), the CD8~+T cells did not change significantly (P? 0.05), and mouse spleen lymphocyte subsets and immune group of rEg.mMDH There was no significant change in the control group, suggesting that the protective mechanism in mice immunized with rEg.ferritin CD4~+T cells, not CD8~+T cells; detection of MTT showed that the rEg.ferritin immunized mice in spleen lymphocyte proliferation stimulated by rEg.ferritin was significantly higher than the control group (P0.01), and rEg.mMDH had no significant effect (P? 0.05), protection the mechanism may be related to the rEg.ferritin antigen in mice stimulated proliferation of splenic lymphocytes. The protective mechanism of immunity in mice induced by the conclusion of rEg.ferritin antigen and activation of CD4~+T cells, stimulate the proliferation of spleen lymphocytes, and rEg.mMDH antigen immune protection mechanism may not activate CD4~+T cells did not stimulate the proliferation of lymphocytes in spleen.

【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R392

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本文編號：1387055