本文關(guān)鍵詞：抗生素誘導(dǎo)小鼠小腸菌群失衡對樹突細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的影響　出處：《大連醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 樹突細(xì)胞 免疫磁珠分選 流式細(xì)胞術(shù)

【摘要】：目的： 通過分析小鼠小腸菌群失衡前后小腸中樹突細(xì)胞的形態(tài)、數(shù)量、亞型及功能的變化，探討菌群失衡對小腸中樹突細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能的影響。 方法： 1.抗生素誘導(dǎo)小鼠小腸菌群失衡的菌群檢測：實驗分為兩組，正常對照組與菌群失衡組。正常對照組小鼠灌服無菌水，菌群失衡組小鼠灌服400mg/ml頭孢曲松鈉，每次0.2ml，每日2次，間隔6h，連續(xù)8d；分析小鼠小腸菌群，建立小鼠小腸菌群失衡模型。 2.小鼠小腸樹突細(xì)胞的分離、純化 (1)應(yīng)用EDTA震蕩法去上皮與IV型膠原酶消化法制備小腸粘膜單細(xì)胞懸液。 (2)應(yīng)用CD11c免疫磁珠法進(jìn)行小鼠小腸樹突細(xì)胞的分離、純化。 3.菌群失衡對腸道樹突細(xì)胞的影響 (1)透射電鏡技術(shù)觀察小鼠小腸粘膜中樹突細(xì)胞形態(tài)的變化。 (2)流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠小腸粘膜中樹突細(xì)胞上CD11c、CD11b、CD8a、MHC-II、CD86、CD80、CD40、CD83、CD205的變化。 (3)RT-PCR技術(shù)檢測小鼠小腸樹突細(xì)胞上IL-10、1L-12mRNA水平的變化。 結(jié)果： 1.抗生素誘導(dǎo)小鼠小腸菌群失衡的菌群檢測：通過抗生素頭孢曲松鈉的誘導(dǎo)可以建立穩(wěn)定的小鼠小腸菌群失衡模型。菌群失衡后小鼠小腸菌群數(shù)量及種類明顯減少。雙歧桿菌、類桿菌、梭桿菌、韋榮球菌、葡萄球菌的數(shù)量幾乎降至零。 2.小鼠小腸粘膜樹突細(xì)胞的分離、純化：經(jīng)免疫磁珠分選系統(tǒng)分離純化的樹突細(xì)胞，光學(xué)顯微鏡下可觀察到小腸中分離的樹突細(xì)胞有大小不等的突起，由于多聚甲醛的固定作用，樹突大多不明顯。膠原酶消化與免疫磁珠分選后，經(jīng)過兩根MS柱純度可達(dá)到55%-60%，連續(xù)多根柱子后純度可更高。 3.菌群失衡對小腸樹突細(xì)胞的影響 (1)對小腸樹突細(xì)胞的形態(tài)的影響：固有膜正常對照組樹突細(xì)胞有大小不等的偽足，細(xì)胞邊緣清晰，細(xì)胞核不規(guī)則。菌群失衡組與正常對照組比較樹突細(xì)胞偽足變短，細(xì)胞邊緣模糊，不規(guī)則。細(xì)胞質(zhì)變小。 (2)對小腸樹突細(xì)胞的結(jié)構(gòu)的影響：菌群失衡后小腸粘膜CD11c樹突細(xì)胞的數(shù)量較正常對照組顯著增高(P=0.0001)。CD11c樹突細(xì)胞兩種亞群較正常對照組均無明顯變化CD11c+CD11b+(P=0.773)，CD11c+CD8a+(P=0.235)。 (3)對小腸樹突細(xì)胞的功能的影響：菌群失衡后小鼠小腸CD11c樹突細(xì)胞上表達(dá)的CD205未見明顯變化(P=0.816)。CD11c樹突細(xì)胞上表達(dá)的MHC-II、CD86、CD80、CD40均顯著降低，其P值分別為0.0001、0.030、0.036、0.008。CD11c+樹突細(xì)胞上表達(dá)的CD83顯著降低(P=0.003)。CD11c樹突細(xì)胞上IL-10表達(dá)明顯升高，IL-12表達(dá)明顯降低。 結(jié)論： 1.抗生素頭孢曲松鈉干擾腸道菌群，可建立小鼠小腸菌群失衡模型。 2.利用MACS系統(tǒng)可對小腸粘膜樹突細(xì)胞進(jìn)行分離與純化。 3.菌群失衡可造成小鼠小腸樹突細(xì)胞形態(tài)的變化，數(shù)量的增加，抗原遞呈功能與成熟度的降低。而對樹突細(xì)胞的亞群及抗原攝取功能影響較小。 4.菌群失衡促進(jìn)小鼠小腸樹突細(xì)胞上IL-10的表達(dá)，抑制IL-12的表達(dá)，影響其免疫調(diào)節(jié)功能。
[Abstract]:Objective:
By analyzing the morphology, quantity, subtype and function of dendritic cells in the small intestine before and after the imbalance of intestinal flora in mice, we explored the effect of bacterial imbalance on the structure and function of dendritic cells in the small intestine.
Method錛，

本文編號：1382351