本文關(guān)鍵詞：三維組織化肝細(xì)胞模型反映非諾貝特的體內(nèi)作用　出處：《浙江大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 脂肪代謝 凝膠包埋培養(yǎng) 降脂藥物 非諾貝特 藥理 毒理

【摘要】：隨著人們生活水平的提高,高血脂已經(jīng)成為常見的現(xiàn)象。它是引起人類動脈粥樣硬化等疾病的主要因素之一。因此,世界各國都很重視降脂藥物的研發(fā)。肝臟是體內(nèi)脂肪代謝的重要器官,也是降血脂藥物調(diào)節(jié)脂肪代謝的主要作用位點和產(chǎn)生毒性的靶器官。在降血脂藥物的研發(fā)過程中,藥物對肝臟脂肪代謝的影響(即藥效)和毒性是重點考察的內(nèi)容。然而,體內(nèi)實驗成本高、周期長,因此需要有效的肝細(xì)胞體外培養(yǎng)模型,作為降脂藥物藥理和毒性評價的早期篩選工具。目前,已有的體外肝細(xì)胞模型包括三明治、聚球體和單層貼壁等。然而這些模型都有不可避免的缺陷,如三明治模型細(xì)胞間缺乏間隙連接,聚球體模型制備方法復(fù)雜、重復(fù)性差。而應(yīng)用最廣泛的單層貼壁模型,雖然操作方便且重復(fù)性好,但是由于缺乏與體內(nèi)類似的微環(huán)境,其脂肪代謝水平與肝臟差異較大,且對藥效和毒性也不夠敏感。不僅如此,單層貼壁與三明治培養(yǎng)的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪代謝相關(guān)基因表達水平與體內(nèi)肝細(xì)胞有較大區(qū)別。 本文針對已有肝細(xì)胞體外模型的缺點,采用由本實驗室自主研發(fā),細(xì)胞間微環(huán)境更接近體內(nèi),并能長期維持細(xì)胞功能的三維凝膠包埋培養(yǎng)模型,進行肝細(xì)胞脂肪代謝以及典型降血脂藥物-非諾貝特藥理與毒理的體外研究,并通過與單層貼壁模型以及體內(nèi)情況的對比驗證該模型的可靠性。 本文首先考察單層貼壁和凝膠包埋模型中肝細(xì)胞脂肪代謝的差別,發(fā)現(xiàn)凝膠包埋的肝細(xì)胞脂肪代謝更接近體內(nèi)肝臟,證明了其作為脂肪代謝體外模型的可行性。其次,利用兩種模型研究了非諾貝特的藥理,結(jié)果顯示非諾貝特對凝膠包埋培養(yǎng)肝細(xì)胞的脂肪代謝有明顯的調(diào)節(jié)作用,但在單層貼壁培養(yǎng)模型無法體現(xiàn)。隨后,本文評價了非諾貝特對兩種模型肝細(xì)胞的短期毒性,結(jié)果發(fā)現(xiàn)凝膠包埋培養(yǎng)的肝細(xì)胞對非諾貝特的毒性更為敏感,且能正確反映體內(nèi)毒性作用。而單層貼壁模型低估了非諾貝特應(yīng)有的毒性。最后,采用能長期維持肝細(xì)胞功能的凝膠包埋模型進行了非諾貝特的長期毒性研究。結(jié)果顯示,凝膠包埋模型能夠反映非諾貝特的長期毒性和毒理,并同時顯示了其毒理與其藥理的關(guān)聯(lián)性。 總之,凝膠包埋模型能較好地模擬體內(nèi)脂肪代謝,體現(xiàn)降血脂藥物的藥理,并能反映降血脂藥物的短期和長期毒性。因此,該模型在降血脂藥的篩選、安全評價和機理研究等方面有較好的應(yīng)用前景。
[Abstract]:With the improvement of people's living standard, hyperlipidemia has become a common phenomenon. It is one of the main factors that cause human diseases such as atherosclerosis. Therefore, all countries in the world attach great importance to develop lipid-lowering drugs. The liver is an important organ of fat metabolism, is the main site of action of lipid lowering drugs regulate lipid metabolism and toxicity of the target organ. In the development process of lipid-lowering drugs, drug effects on liver lipid metabolism (i.e., efficacy and toxicity) is the focus of the content of the study. However, the in vivo experiment of high cost, long cycle, therefore need to be suitable in vitro models, as an early screening tool for the evaluation of the pharmacology and toxicity of lipid-lowering drugs. At present, in vitro models of hepatocytes include sandwich, spheroid and monolayer. However, these models have some unavoidable defects, such as lack of cellular sandwich model The gap junction, spheroid model preparation method is complex and poor repeatability. And the single most widely used wall model, although convenient operation and good reproducibility, but due to lack of microenvironment in vivo and similar, with the level of liver fat metabolism is different, and the efficacy and toxicity are not sensitive enough. Not only that, monolayer and sandwich cultured hepatocytes lipid metabolism related gene expression differences between hepatic cells in vivo.
Aiming at the disadvantages existing in vitro liver cell model, used by our laboratory, cell micro environment close to the body, the three-dimensional gel and can maintain cell function for long time embedding culture model in vitro for hepatic fat metabolism and typical hypolipidemic drugs - fenofibric special pharmacology and toxicology, and the reliability of the model the validation by comparison with the monolayer model and in vivo conditions.
This paper first studies the monolayer and gel entrapped hepatocytes fat metabolism model difference, found that hepatocyte lipid metabolism gel entrapped closer to the liver in vivo, proved its feasibility as fat metabolism in vitro model. Secondly, study the characteristics of fenofibric the pharmacology of two kinds of models, results show that the effects of fenofibrate on the gel pack the metabolism of fat liver cell culture embedded in a clear regulatory role, but in the monolayer culture model can not reflect the. Subsequently, the short-term toxicity of fenofibrate on two models of liver cells, the toxicity of gel entrapment culture of liver cells of fenofibrate is more sensitive, and can reflect the toxicity in vivo. The monolayer model underestimates the toxicity of fenofibrate should have. Finally, the embedding model of the long-term toxicity research of fenofibrate with liver cell function in long-lasting gel The results showed that the gel entrapment model could reflect the long-term toxicity and toxicology of fenofibrate, and showed the relationship between its toxicology and its pharmacology at the same time.
In conclusion, gel embedding model can simulate fat metabolism in vivo, reflect the pharmacology of hypolipidemic drugs, and reflect the short-term and long-term toxicity of hypolipidemic drugs. Therefore, this model has a good application prospect in screening, safety evaluation and mechanism research of hypolipidemic drugs.

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R-332

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本文編號：1372079