本文關(guān)鍵詞：HCV刺激鼠小膠質(zhì)細(xì)胞后TLR7和細(xì)胞因子的表達(dá)研究　出處：《寧夏醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的研究HCV陽(yáng)性血清刺激小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞BV2(BV2細(xì)胞)后,BV2細(xì)胞內(nèi)TLR7的表達(dá)變化,及其信號(hào)通路介導(dǎo)的細(xì)胞因子IL-6、TNF-α和IFN-α的表達(dá)變化,探討TLR7在抗HCV免疫應(yīng)答中的作用機(jī)制和對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)可能的免疫發(fā)病機(jī)制。 方法用含20%HCV的陽(yáng)性血清刺激BV2細(xì)胞,在刺激后不同時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞及培養(yǎng)上清液,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)、間接免疫熒光標(biāo)記的流式細(xì)胞術(shù)(FCM)及酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)分別檢測(cè)TLR7 mRNA、TLR7蛋白及IL-6、TNF-α和IFN-α的表達(dá)水平,同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組和正常人血清組。多組均數(shù)間的比較采用方差分析。 結(jié)果在BV2細(xì)胞中有TLR7 mRNA和TLR7蛋白的表達(dá);HCV刺激BV2細(xì)胞后,可誘導(dǎo)TLR7 mRNA和TLR7蛋白表達(dá)水平升高,12h、24 h、48 h HCV陽(yáng)性血清組較空白組及正常人血清組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);我們還觀察到TLR7 mRNA和TLR7蛋白隨時(shí)間延長(zhǎng)呈遞增趨勢(shì),HCV陽(yáng)性血清組培養(yǎng)上清液中IL-6、TNF-α的表達(dá)也呈遞增趨勢(shì),IL-6在刺激后48 h與正常人血清組及空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),TNF-α在刺激后24 h、48 h時(shí)與正常人血清組及空白對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),IFN-α在在刺激24 h后表達(dá)低水平增高(P0.05),但持續(xù)時(shí)間較短。 結(jié)論HCV陽(yáng)性血清刺激BV2細(xì)胞后,細(xì)胞胞體增大,表面的突起變短、增粗;TLR7表達(dá)顯著升高,TLR7激活后能夠啟動(dòng)BV2細(xì)胞的固有免疫反應(yīng);IL-6和TNF-α變化趨勢(shì)與TLR7一致,IFN-α在HCV陽(yáng)性血清刺激后24小時(shí)短時(shí)間增高;表明TLR7可能在HCV導(dǎo)致的CNS的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。
[Abstract]:Objective To study the expression of TLR7 in BV2 cells and the expression of IL - 6 , TNF - 偽 and IFN - 偽 in BV2 cells following the stimulation of BV2 ( BV2 cells ) in mice with HCV positive serum . The mechanism of TLR7 in anti - HCV immune response and possible mechanisms for immune pathogenesis of central nervous system were discussed . Methods The expression levels of TLR7 mRNA , TLR7 protein and IL - 6 , TNF - 偽 and IFN - 偽 were detected by real - time fluorescence quantitative PCR ( RT - qPCR ) , indirect immunofluorescence labeled flow cytometry ( FCM ) and enzyme - linked immunosorbent assay ( ELISA ) . The levels of TLR7 mRNA , TLR7 protein and IL - 6 , TNF - 偽 and IFN - 偽 were detected by means of real - time fluorescence quantitative PCR ( RT - qPCR ) , indirect immunofluorescence labeled flow cytometry ( FCM ) and enzyme - linked immunosorbent assay ( ELISA ) . Results The expression of TLR7 mRNA and TLR7 in BV2 cells was significantly higher than that in normal controls ( P0.05 ) . Conclusion After stimulation of BV2 cells with HCV positive serum , the cell volume is increased , the protrusion of the surface becomes shorter , the thickening is increased , and the expression of TLR7 is significantly increased . After TLR7 is activated , the innate immune response of BV2 cells can be activated ; the change trend of IL - 6 and TNF - 偽 is consistent with TLR7 , and IFN - 偽 is increased within 24 hours after HCV positive serum stimulation ; it is suggested that TLR7 may play an important role in the pathogenesis of the CNS caused by HCV .

【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R329

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