本文關(guān)鍵詞：運用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與埃博拉病毒GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的宿主蛋白　出處：《軍事醫(yī)學(xué)》2017年04期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的運用酵母雙雜交技術(shù)從人肝cDNA文庫中篩選出與埃博拉病毒(EBOV)GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的宿主蛋白,用于研究GP、VP30、NP、L蛋白在EBOV傳染病中的生物學(xué)功能。方法利用重組PCR技術(shù)構(gòu)建誘餌質(zhì)粒pGBKT7-GP、pGBKT7-VP30、pGBKT7-NP、pGBKT7-L,將誘餌菌株與人肝cDNA文庫菌株進(jìn)行雜交篩選,對篩選到的陽性克隆進(jìn)行DNA測序和生物信息學(xué)分析,然后再利用酵母回復(fù)性實驗進(jìn)一步驗證,排除假陽性結(jié)果。結(jié)果成功構(gòu)建了誘餌質(zhì)粒pGBKT7-GP、pGBKT7-VP30、pGBKT7-NP、pGBKT7-L,篩選出6個可能與GP、VP30、NP、L蛋白有相互作用的宿主蛋白,分別是COMMD1、ALB、PSMD8、APOA2、CYP2E1、HP。酵母回復(fù)性實驗進(jìn)一步說明了COMMD1和APOA2與NP蛋白可能存在相互作用。結(jié)論酵母雙雜交篩選出多個可能與EBOV的GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的捕獲蛋白,為研究EBOV的致病機制提供了參考。
[Abstract]:Objective to screen host proteins interacting with cDNA protein of Ebola virus (EBOV) in human liver by yeast two-hybrid technique, and to study GP. Methods the bait plasmid pGBKT7-GPPGBKT7-VP30 was constructed by recombinant PCR technique. PGBKT7-NPPGBKT7-L. the decoy strain was hybridized with human liver cDNA library strain, and the positive clones were sequenced by DNA and bioinformatics analysis. Then the yeast reversibility experiment was used to further verify and exclude the false positive results. Results the bait plasmid pGBKT7-GPPGBKT7-VP30 pGBKT7-NP was successfully constructed. PGBKT7-L. six host proteins, which may interact with the protein of GPV VP30, were identified as COMMD1, ALB, PSMD8 and APOA2, respectively. CYP2E1. Yeast reversibility test further showed that COMMD1 and APOA2 may interact with NP protein. Conclusion yeast two-hybrid screening of multiple GPVP30 which may be associated with EBOV. NPL protein has interacted capture protein, which provides a reference for studying the pathogenesis of EBOV.
【作者單位】： 安徽大學(xué)健康科學(xué)研究院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金應(yīng)急管理資助項目(81550001);國家自然科學(xué)基金重大資助項目(81590766) 病原微生物生物安全國家重點實驗室開放研究基金資助項目(SKLPBS1507)
【分類號】：R373
【正文快照】： 埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)屬于絲狀病毒科埃博拉病毒屬,在1976年首次發(fā)現(xiàn)于蘇丹的恩扎拉和剛果(金)(舊稱扎伊爾)的埃博拉河地區(qū)[1]。2014年2月,西非暴發(fā)了最近一次的EBOV疫情,再次引起廣泛關(guān)注。EBOV能引起嚴(yán)重的出血熱癥狀,對人類以及其他靈長類動物都是致命的[2]。在感

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本文編號：1360865