本文關(guān)鍵詞：流式細(xì)胞術(shù)外周血淋巴細(xì)胞亞群分析標(biāo)準(zhǔn)化的部分調(diào)研　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：[背景和目的] 流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM)淋巴細(xì)胞亞群分析是一項(xiàng)較新而操作復(fù)雜的技術(shù),在實(shí)驗(yàn)過程中,多種因素均可影響FCM的分析結(jié)果。發(fā)達(dá)國家流式細(xì)胞術(shù)起步早,發(fā)展快,其操作也很規(guī)范。美國疾病控制中心(Center for Disease Control and Prevention, CDC)、美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(Clinical and Laboratory Standard Institute, CLSI)在20世紀(jì)90年代出臺(tái)了FCM淋巴細(xì)胞亞群分析的標(biāo)準(zhǔn)化方案,此后隨著FCM儀器和試劑的不斷更新?lián)Q代,這些標(biāo)準(zhǔn)化方案也得到了進(jìn)一步完善。我國目前FCM淋巴細(xì)胞亞群分析還沒有公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)化方案,國內(nèi)FCM分析在參考范圍、質(zhì)量控制、試劑和儀器選擇等方面仍然存在許多問題。 本研究旨在調(diào)研部分臨床實(shí)驗(yàn)室FCM淋巴細(xì)胞亞群分析參考范圍應(yīng)用的合理性、FCM室內(nèi)質(zhì)控品的使用及不同生產(chǎn)廠家的流式細(xì)胞儀和試劑組合對(duì)淋巴細(xì)胞亞群分析結(jié)果的影響,以期為建立FCM淋巴細(xì)胞亞群分析的標(biāo)準(zhǔn)化方案提供有力證據(jù)。 [對(duì)象和方法] 研究對(duì)象包括76例北京協(xié)和醫(yī)院門診及住院患者,50例北京協(xié)和醫(yī)院體檢中心健康體檢者。 根據(jù)國內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)室常用的3個(gè)流式細(xì)胞儀型號(hào)(Beckman Coulter Epics XL、Beckman Coulter Cytomics FC500、BD FACS Calibur),分別選取3家北京地區(qū)臨床流式細(xì)胞室(A、B、C室),按照各室的實(shí)際檢測方案分別測定50份健康人靜脈血標(biāo)本,以驗(yàn)證各室淋巴細(xì)胞亞群分析參考范圍是否合理。調(diào)查3家實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)全血質(zhì)控品使用情況,并將商品化全血質(zhì)控品分發(fā)各室,按照各自的實(shí)際實(shí)驗(yàn)方案在20個(gè)工作日內(nèi)與常規(guī)標(biāo)本平行處理、檢測和分析。針對(duì)不同生產(chǎn)廠家的試劑,在同一流式細(xì)胞儀(型號(hào)為Beckman Coulter Epics XL)上用a、b、c、d4種不同的試劑組合對(duì)20份患者標(biāo)本進(jìn)行檢測,其中試劑組合a為美國BeckmanCoulter公司同廠配套試劑和儀器,試劑組合b、c、d的檢測結(jié)果分別與試劑組合a比較。采用相同試劑和溶血素(美國Beckman Coulter公司)對(duì)24份患者標(biāo)本進(jìn)行前處理,分別在2臺(tái)不同廠家和型號(hào)的流式細(xì)胞儀(型號(hào)為Beckman Coulter Epics XL和BD FACS Calibur)上檢測,比較相同試劑處理標(biāo)本后不同儀器對(duì)淋巴細(xì)胞亞群分析結(jié)果的影響。采用同廠配套試劑和儀器,比較Beckman Coulter EpicsXL和BD FACS Calibur兩個(gè)流式細(xì)胞檢測系統(tǒng)對(duì)32份患者標(biāo)本檢測結(jié)果的影響。 [研究結(jié)果] 1.A室的NK及T4/T8,B、C兩室的T4均有大于10%的結(jié)果落在相應(yīng)的參考范圍之外,超出相應(yīng)參考范圍的概率分別為16%(9/50)、24%(12/50)、22%(11/50)、12%(6/50)。 2.20個(gè)工作日內(nèi),A室的T3、T4、T8、NK細(xì)胞相對(duì)計(jì)數(shù),B、C 2家實(shí)驗(yàn)室所有項(xiàng)目(T3、T4、T8、B、NK)的質(zhì)控結(jié)果均在控。A室的B淋巴細(xì)胞相對(duì)計(jì)數(shù)的20個(gè)工作日內(nèi)質(zhì)控結(jié)果出控率為15%(3/20)。 3.與試劑組合a比較,試劑組合b、c的所有項(xiàng)目偏倚均較大,其中偏倚10%的概率最低為試劑組合b的T8,為70%(14/20)；最高為試劑組合b、c的T3、T4,均達(dá)到100%(20/20)；試劑組合d的T3、T8和B偏倚較大,偏倚10%的概率分別為35%(7/20)、85%(17/20)、75%(15/20)。Bland-Altman—致性分析、平均相似百分率及相似百分率的CV分析顯示只有試劑組合d的T4、NK的一致性相對(duì)較好。 4.用相同試劑前處理標(biāo)本,在不同儀器上分析標(biāo)本的結(jié)果,與采用同一生產(chǎn)廠家的試劑和儀器處理和分析的結(jié)果相比,T3、T4、T8、B、NK均存在較大偏倚,偏倚10%的概率分別為58%(14/24)、79%(19/24)、38%(9/24)、33%(8/24)、92%(22/24)。Bland-Altman一致性分析顯示所有指標(biāo)中T8、B細(xì)胞的平均偏倚相對(duì)較小,但T8的LOA較寬(-7.46～7.74)。平均相似百分率及相似百分率的CV比較顯示,所有指標(biāo)僅T8、B細(xì)胞相對(duì)計(jì)數(shù)的平均相似百分率最接近100%,但兩者的相似百分率CV偏大,分別為7.12%,9.28%。 5. Beckman Coulter Epics XL和BD FACS Calibur兩個(gè)流式細(xì)胞檢測系統(tǒng)相比較,T4、T8、NK和B的偏倚均較大,偏倚10%的概率分別為34%(11/32),44%(14/32)、63%(20/32)、59%(19/32)。Bland-Altman一致性分析顯示僅T3的一致性相對(duì)較好。平均相似百分率及相似百分率的CV比較顯示,T3、T4相對(duì)計(jì)數(shù)的平均相似百分率最接近100%,但T3的相似百分率CV最小。[結(jié)論] 在FCM分析淋巴細(xì)胞亞群的參考范圍方面,每個(gè)實(shí)驗(yàn)室或每個(gè)分析系統(tǒng)應(yīng)該建立自己的參考范圍并定期驗(yàn)證其參考范圍。質(zhì)控方面,流式細(xì)胞室應(yīng)該定期進(jìn)行全血質(zhì)控品檢查,并累計(jì)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù),建立自己的質(zhì)控范圍。如果質(zhì)控結(jié)果超出自己建立的質(zhì)控范圍,則需要優(yōu)化整個(gè)分析流程,包括標(biāo)本的前處理、儀器的調(diào)試、數(shù)據(jù)的分析等。試劑和儀器方面,流式細(xì)胞室應(yīng)選擇同廠配套試劑。此外,流式細(xì)胞室應(yīng)加強(qiáng)工作人員的業(yè)務(wù)培訓(xùn)和學(xué)術(shù)交流。這樣才能保證結(jié)果準(zhǔn)確可靠,各室之間的分析結(jié)果具有可比性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1355630