感應(yīng)激酶BfmS對(duì)銅綠假單胞菌運(yùn)動(dòng)產(chǎn)色素及毒力調(diào)控的研究
本文關(guān)鍵詞:感應(yīng)激酶BfmS對(duì)銅綠假單胞菌運(yùn)動(dòng)產(chǎn)色素及毒力調(diào)控的研究 出處:《南京大學(xué)》2012年碩士論文 論文類型:學(xué)位論文
更多相關(guān)文章: 銅綠假單胞菌 BfmRS 雙組分系統(tǒng)
【摘要】:銅綠假單胞菌,又稱為綠膿桿菌。廣泛存在于自然界及正常人皮膚、腸道和呼吸道,是臨床上較常見的條件致病菌之一。這種細(xì)菌能夠產(chǎn)生眾多的毒力因子,能夠引起免疫功能低下、皮膚燒傷或者囊腫性纖維化患者嚴(yán)重的感染。感染后因濃汁和滲出液等病料呈綠色,故名。 銅綠假單胞菌中有眾多的雙組份系統(tǒng)。典型的雙組份系統(tǒng)由一個(gè)結(jié)合在細(xì)胞膜上的組氨酸激酶感應(yīng)蛋白和介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)應(yīng)答的調(diào)控蛋白構(gòu)成。細(xì)胞膜上的組氨酸激酶感應(yīng)蛋白,能夠感知環(huán)境中的各種刺激,比如光信號(hào),特殊的小分子物質(zhì),溫度,滲透壓和pH等。細(xì)胞膜上的感應(yīng)蛋白一旦被激活后,能夠在其特定的組氨酸殘基上發(fā)生自磷酸化,然后自催化將組氨酸上的磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移至應(yīng)答調(diào)控蛋白的天冬氨酸殘基上。磷酸化后的應(yīng)答調(diào)控蛋白的構(gòu)象發(fā)生變化,從而調(diào)控不同靶基因的表達(dá)。應(yīng)答調(diào)控蛋白的磷酸化水平調(diào)控其自身的活性。 本文研究的BfmS (Biofilm maturation Sensor)是銅綠假單胞菌細(xì)胞內(nèi)的一個(gè)感應(yīng)激酶,和另外一個(gè)與之對(duì)應(yīng)的應(yīng)答調(diào)控蛋白BfmR (Biofilm maturation Regulator)構(gòu)成了銅綠假單胞菌中的一個(gè)雙組份系統(tǒng)。根據(jù)已有的研究報(bào)道,雙組份系統(tǒng)BfmRS在銅綠假單胞菌生物膜正常發(fā)育、形成和架構(gòu)方面發(fā)揮非常重要的作用。同時(shí),這一雙組份系統(tǒng)在生物膜形成過程中控制著噬菌體介導(dǎo)的銅綠假單胞菌的裂解和DNA的釋放。但是,經(jīng)過本文的研究發(fā)現(xiàn),銅綠假單胞菌中的這一雙組份系統(tǒng)BfmRS,對(duì)細(xì)菌的各種毒力因子或毒力因子相關(guān)的過程有顯著的調(diào)控作用,包括群集運(yùn)動(dòng),綠膿菌素的產(chǎn)生,蛋白酶和鼠李糖脂的分泌。銅綠假單胞菌的游動(dòng)能力能夠協(xié)助其擴(kuò)散,是銅綠假單胞菌定殖并形成生物膜的前奏。綠膿菌素是銅綠假單胞菌分泌的一種藍(lán)綠色的有毒代謝物,分子構(gòu)造顯示具有抗菌活性,且在氧化應(yīng)激下能誘導(dǎo)秀麗隱桿線蟲死亡。銅綠假單胞菌能夠分泌各種蛋白酶,這些蛋白酶能夠降解宿主內(nèi)的膠原蛋白等,幫助銅綠假單胞菌的擴(kuò)散和侵染。鼠李糖脂是銅綠假單胞菌特有的分泌物。它最突出的特性是其表面活性,如能顯著降低表面張力,改變固體表面的濕潤性。因其優(yōu)良的憎水親水兩性性質(zhì),目前運(yùn)用于采油工業(yè),環(huán)境治理以及生物農(nóng)藥的開發(fā)。本文研究通過構(gòu)造BfmS缺失突變株和BfmRS雙缺失突變株,發(fā)現(xiàn)相對(duì)于野生型的銅綠假單胞菌來說,BfmS缺失突變株群集運(yùn)動(dòng)能力顯著下降。BfmS突變株產(chǎn)生的綠膿菌素,膿菌素和綠膿紅素減少。此外,BfmS缺失突變株鼠李糖脂產(chǎn)量下降。這些結(jié)果用互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)做了驗(yàn)證,互補(bǔ)菌株均能恢復(fù)或者部分恢復(fù)缺陷株的表型。進(jìn)一步采用報(bào)告基因分析發(fā)現(xiàn),在靜態(tài)期早期,BfmS調(diào)控了rh1AB和bfmR基因的表達(dá),BfmS缺失突變株中rh1AB表達(dá)降低。rh1AB是鼠李糖脂合成代謝路徑中的關(guān)鍵基因。對(duì)銅綠假單胞菌的rhl群體感應(yīng)系統(tǒng)(Quorum Sensing System)的相關(guān)調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄深入研究,發(fā)現(xiàn)rhlI和rh1R轉(zhuǎn)錄各有不同水平的降低。推測(cè)BfmRS可能是獨(dú)立的或者是依賴于rhl-群體感應(yīng)系統(tǒng)調(diào)控相關(guān)的靶基因。定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,BfmR可能通過磷酸化的方式調(diào)節(jié)靶基因。BfmS缺失突變株的中bfmR表達(dá)顯著增高,結(jié)合點(diǎn)突變結(jié)果,BfmS可能于轉(zhuǎn)錄水平和翻譯后修飾調(diào)控BfmR。而BfmS感應(yīng)蛋白在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)以磷酸酯酶的形式行使生物功能。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2012
【分類號(hào)】:R378.991
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