本文關鍵詞：表達綠色熒光蛋白的重組人偏肺病毒的構建及其致病性的研究　出處：《內蒙古農業(yè)大學》2011年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：人偏肺病毒(Human metapneumovirus,HMPV)屬于副粘病毒科偏肺病毒屬,是偏肺病毒屬中唯一能感染人類的單股負鏈不分節(jié)段RNA病毒�，F(xiàn)有流行病學資料顯示,HMPV呈全球流行,為兒科較為常見的呼吸道病原。臨床癥狀與肺病毒屬的呼吸道合胞病毒(RSV)感染相似,出現(xiàn)嚴重的咳嗽,氣管炎和肺炎,經(jīng)常伴有高熱,肌痛和嘔吐,并導致免疫功能不全者死亡。 HMPV主要有A、B兩型,分別以加拿大分離株CAN97-83(NL/1/00)及CAN98-75(NL/1/99)為代表,每型內又可分為兩個不同的亞型。 本研究采用反向遺傳學技術,在HMPV NL/1/99(B型)代表株基因組內插入表達增強綠色熒光的外源基因,成功救獲了重組病毒rHMPV NL/1/99-EGFP。通過熒光共聚焦、電鏡觀察及生長動力學研究,證實最終拯救出具有感染性的rHMPV NL/1/99-EGFP重組病毒顆粒且救獲病毒保持野生型HMPV的特點。采用改良噬斑形成試驗測定病毒滴度,根據(jù)Reed-Muench的方法比較分析結果表明,重組病毒rHMPV NL/1/99-EGFP與野生型HMPV NL/1/99的生長動力學曲線及最高生長滴度基本一致。rHMPV NL/1/99-EGFP在Vero-E6細胞連續(xù)傳代10次仍保持綠色熒光蛋白的穩(wěn)定表達及其所有生物學特性保持不變。在此基礎上,比較研究了rHMPV NL/1/99-EGFP(B型)及rHMPV NL/1/00-EGFP(A型)對小鼠和各細胞的致病性,采用改良噬斑形成試驗測定病毒滴度,結果表明,rHMPV NL/1/00-EGFP的感染性及致病力均比rHMPV NL/1/99-EGFP強。 本研究填補了國內相同研究領域的空白,首先,重組病毒對外源基因的穩(wěn)定表達使HMPV具有作為疫苗載體應用的可能性。其次,以EGFP蛋白作為病毒示蹤物對實驗條件要求不高,便于檢測,使得在rHMPV NL/1/99-EGFP基礎上進行病毒致病機制和基因功能研究變得更為便利。第三,對兩株重組HMPV致病性的研究為病毒基因組的改造,從而為HMPV減毒活疫苗的研制奠定基礎。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：內蒙古農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R373

【共引文獻】

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本文編號：1353812