發(fā)布時(shí)間：2017-12-30 06:08

  本文關(guān)鍵詞：艱難梭菌毒素C蛋白的克隆表達(dá)和抗體制備　出處：《中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志》2017年07期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的克隆艱難梭菌毒素C(tcdC)基因并構(gòu)建TcdC蛋白的原核表達(dá)載體,制備多克隆抗體。方法從艱難梭菌標(biāo)準(zhǔn)株(ATCC43255)基因組DNA中擴(kuò)增獲得tcdC基因的部分片段,連接到原核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中,誘導(dǎo)表達(dá)GST-TcdC/L和IL1-TcdC/L融合蛋白,前者用作免疫抗原,后者用作檢測(cè)抗原。采用SDS-PAGE法鑒定融合蛋白的表達(dá),并通過(guò)Ni柱純化IL1-TcdC/L融合蛋白,Q柱純化GST-TcdC/L融合蛋白。將純化的GST-TcdC/L融合蛋白于兔背部皮內(nèi)多點(diǎn)注射,每只1 mg,4周1次,共3次。最后1次免疫后2周,采血分離血清。用IL1-TcdC/L蛋白包被酶聯(lián)板,采用ELISA法檢測(cè)多抗血清效價(jià);Western蛋白印跡法檢測(cè)多抗特異性,結(jié)果 SDS-PAGE結(jié)果表明,所表達(dá)的2個(gè)融合蛋白與預(yù)期分子質(zhì)量一致。ELISA結(jié)果顯示,制備的TcdC多克隆抗體效價(jià)1:6.4×10~4。Western蛋白印跡實(shí)驗(yàn)顯示,制備的TcdC/L多克隆抗體能特異性識(shí)別艱難梭菌中的TcdC蛋白。結(jié)論成功克隆了艱難梭菌tcdC/L基因并進(jìn)行了原核表達(dá),成功制備了其多克隆抗體,為后續(xù)研究tcdC基因在艱難梭菌致病過(guò)程中的作用及機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【作者單位】： 河北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所;浙江省疾病預(yù)防控制中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81471998) 國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)科學(xué)研究基金-浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生重大科技計(jì)劃(WKJ-ZJ-1507) 河北大學(xué)研究生創(chuàng)新項(xiàng)目(X2016072)~~
【分類號(hào)】：R392-33
【正文快照】： 艱難梭菌(C/osWd/um d/Wc/_/e,CD)是革蘭陽(yáng)性芽孢桿菌,1935年Hall和O'Toole 11首次從新生兒糞便中分離。該菌一般寄生在人腸道內(nèi),無(wú)莢膜,對(duì)環(huán)境抵抗力較弱,對(duì)氧極度敏感,是人類腸道感染的主要致病菌之一。CD感染是由產(chǎn)毒型CD在腸道過(guò)度增殖并大量釋放毒素引起的一系列感染性疾

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