本文關(guān)鍵詞：酒精誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡作用與神經(jīng)鞘磷脂循環(huán)的關(guān)系　出處：《河南大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的建立酒精誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡模型，觀察酒精對PC12細(xì)胞神經(jīng)鞘磷脂循環(huán)相關(guān)酶活性及其mRNA的表達(dá)量的影響，分析神經(jīng)鞘磷脂循環(huán)在神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的作用，為進(jìn)一步研究神經(jīng)細(xì)胞凋亡機(jī)制打下基礎(chǔ)。 方法MTT法測定酒精對PC12細(xì)胞增殖的抑制作用；用PI/Hoechst33342染色觀察細(xì)胞核形態(tài)學(xué)變化；DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測基因組DNA斷裂； RT-PCR法檢測酒精對PC12細(xì)胞SMS1、SMS2和N-SMase mRNA表達(dá)的影響；薄層層析方法測定SMS的活性；熒光分光光度法檢測N-SMase的活性；采用高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)檢測線粒體膜電位變化；Western-blotting檢測酒精致PC12細(xì)胞凋亡過程中，凋亡關(guān)鍵蛋白Caspase-3、 Caspase-9表達(dá)量變化。 結(jié)果MTT法結(jié)果顯示，用100mmoL/L、200mmoL/L、300mmoL/L、400mmoL/L和800mmoL/L濃度的酒精處理去血清培養(yǎng)PC12細(xì)胞24h，細(xì)胞存活率分別是單純?nèi)パ迮囵B(yǎng)PC12細(xì)胞的85.66%、74.28%、62.47%、54.14%和50.35%，呈濃度依賴性，與對照組比較差異顯著(P0·05)。用PI/Hoechst33342染色法觀察細(xì)胞核形態(tài)學(xué)變化，有典型凋亡現(xiàn)象出現(xiàn)，凋亡率增加。用酒精濃度為100mmoL/L、200mmoL/L、300mmoL/L和400mmoL/L處理去血清培養(yǎng)PC12細(xì)胞24h，DNA瓊脂糖凝膠電泳觀察100mmoL/L、200mmoL/L、300mmoL/L和400mmoL/L濃度酒精處理組呈現(xiàn)凋亡細(xì)胞典型梯狀DNA。RT-PCR方法檢測酒精對PC12細(xì)胞SMS和N-SMase mRNA表達(dá)的影響，結(jié)果顯示，，不同濃度的酒精作用0.5h，SMS1在PC12細(xì)胞中的表達(dá)量沒有明顯的變化，當(dāng)反應(yīng)時間超過1h后，SMS1表達(dá)水平顯著增加；SMS2的mRNA表達(dá)量在8h時下降。不同濃度的酒精作用于PC12細(xì)胞1h內(nèi)，N-SMase活性無明顯變化，當(dāng)作用時間達(dá)到2h，N-SMase活性明顯提高。不同濃度酒精處理PC12細(xì)胞2h，細(xì)胞內(nèi)總SMS活性增高。不同濃度酒精處理PC12細(xì)胞24h， PC12細(xì)胞線粒體膜電位下降并呈濃度依賴性。不同濃度酒精處理PC12細(xì)胞24h，凋亡關(guān)鍵蛋白Caspase-3、Caspase-9表達(dá)量升高。 結(jié)論 酒精能誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)作用隨濃度升高而增強(qiáng)。 酒精誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡與神經(jīng)鞘磷脂循環(huán)有關(guān)。酒精作用于PC12細(xì)胞使SMS1和N-SMase mRNA表達(dá)量增高，酶活性增強(qiáng)，SMS2mRNA表達(dá)量下降。 酒精誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡與線粒體途徑有關(guān)。
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【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1351764