本文關鍵詞：髓過氧化物酶誘導內(nèi)皮細胞凋亡的分子機制　出處：《中南大學》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的探討髓過氧化物酶誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡的分子機制。 方法 1.用不同濃度(0.1u/ml,0.2u/ml,0.4u/ml,0.6u/ml)的髓過氧化物酶干預人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC-12),采用MTT比色法觀察各組的細胞生長抑制率,采用流式細胞術檢測各組的細胞凋亡率。 2.采用逆轉錄PCR、Real-time PCR檢測內(nèi)皮細胞caspase-3、bax mRNA的表達。逆轉錄PCR用灰度分析儀測量各灰度值,計算各灰度值與內(nèi)參(GAPDH)灰度值之比；Real-time PCR采用比較閾值法計算不同干預組與陰性對照組相比的相對表達量。 3.采用western-blot法檢測內(nèi)皮細胞caspase-3、bax蛋白的表達。用灰度分析儀測量各條帶灰度值,計算各灰度值與內(nèi)參(p-actin)灰度值之比。 結果 1. HUVEC-12細胞生長抑制率及凋亡率的變化：與陰性對照組相比,0.4u/ml MPO干預組、0.6u/ml MPO干預組和陽性對照組HUVEC-12細胞生長抑制率明顯升高(P0.05),0.2u/ml干預組、0.4u/ml MPO干預組、0.6u/ml MPO干預組的內(nèi)皮細胞凋亡率明顯升高(P0.05); MPO對內(nèi)皮細胞生長的抑制以及誘導凋亡的作用具有濃度依賴性(P0.05)。 2. HUVEC-12細胞caspase-3mRNA及蛋白的表達：與陰性對照組相比,較高濃度(逆轉錄PCR檢測的濃度為0.4u/ml、0.6u/ml, Real-time PCR為0.2u/ml、0.4u/ml和0.6u/ml) MPO干預組和陽性對照組HUVEC-12細胞caspase-3mRNA表達明顯升高(P0.05)。與陰性對照組相比,0.4u/ml MPO干預組、0.6u/ml MPO干預組和陽性對照組內(nèi)皮細胞caspase-3前體片段蛋白表達明顯降低(P0.05),caspase-3的活化片段蛋白表達明顯升高(P0.05)。且MPO誘導caspase-3mRNA及蛋白的表達具有濃度依賴性(P0.05)。 3. HUVEC-12細胞bax mRNA及蛋白的表達：與陰性對照組相比,較高濃度(逆轉錄PCR檢測的濃度為0.4u/ml、0.6u/ml, Real-time PCR為0.2u/ml、0.4u/ml和0.6u/ml) MPO干預組和陽性對照組HUVEC-12細胞baxmRNA表達明顯升高(P0.05)。與陰性對照組相比,0.4u/ml MPO干預組、0.6u/ml MPO干預組和陽性對照組內(nèi)皮細胞bax蛋白表達明顯升高(P0.05)。且MPO誘導bax mRNA及蛋白的表達具有濃度依賴性(P0.05)。 結論 1.一定濃度的髓過氧化物酶可以誘導HUVEC-12內(nèi)皮細胞凋亡,且在特定濃度范圍內(nèi)具有濃度依賴性。 2.髓過氧化物酶誘導的HUVEC-12內(nèi)皮細胞凋亡可能是通過激活caspase-3信號通路實現(xiàn)的。 3.Bax也可能參與了髓過氧化物酶誘導的HUVEC-12內(nèi)皮細胞凋亡過程。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R363

【參考文獻】

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本文編號：1349733