本文關(guān)鍵詞：人3型腺病毒六鄰體HVR1區(qū)的氨基酸修飾及其免疫特性的研究　出處：《廣州醫(yī)學(xué)院》2012年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的探討人3型腺病毒（HAdV-3）六鄰體HVR1區(qū)的氨基酸修飾及其免疫特性，為HAdV-3載體外源蛋白展示平臺(tái)技術(shù)和基因疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。 方法以pAdΔE3GFP為模板，搭橋PCR擴(kuò)增HVR1區(qū)被修飾的六鄰體片段（含ClaI，BamHI），克隆至穿梭質(zhì)粒pBR322L/R載體上，與骨架質(zhì)粒pAdΔE3GFP在大腸桿菌BJ5183內(nèi)同源重組后，經(jīng)AsisI酶線性化，轉(zhuǎn)染AD293細(xì)胞，拯救包裝腺病毒。通過(guò)熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)重組腺病毒的熱穩(wěn)定性，生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)重組腺病毒的生長(zhǎng)特性，免疫印跡（Western blot）技術(shù)檢測(cè)外源表位在六鄰體上的融合表達(dá)，ELISA分析六鄰體HVR1區(qū)融合的外源表位與標(biāo)簽單抗和免疫血清的結(jié)合活性。 結(jié)果PCR及核酸序列測(cè)定結(jié)果顯示多肽flag、 his6flag或his6lgsflag成功插入至HVR1區(qū)；HVR1區(qū)可以插入長(zhǎng)度至17個(gè)氨基酸的多肽表位而不影響病毒的熱穩(wěn)定性和生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)特性；多肽flag, his6flag或his6lgsflag在六鄰體蛋白上得到表達(dá)并且暴露在病毒粒子表面；小鼠接種病毒rAd3/HVR1-flag,rAd3/HVR1-his6flag和rAd3/HVR1-his6lgsflag所產(chǎn)生的免疫血清可以分別與對(duì)應(yīng)的GST-flag，，GST-his6flag和GST-his6lgsflag中融合的表位相識(shí)別。但是，rAd3/HVR1-his6flag和rAd3/HVR1-his6lgsflag組免疫的血清不能識(shí)別GST-flag和GST-his6融合蛋白。rAd3/HVR1-his6flag組免疫的血清主要是與GST-2（GST-HHHDYK）發(fā)生反應(yīng)，與其它GST所融合的表位不發(fā)生反應(yīng)；rAd3/HVR1-his6lgsflag組免疫的血清可以與GST-1（GST-HHHLGSDYK）, GST-3（GST-HHHHHHLGS）和GST-4（GST-LGSDYKDDD）發(fā)生反應(yīng)，但是與GST-his6lgsflag（GST-HHHHHHLGSDYKDDDDK）中融合的表位結(jié)合效價(jià)最高。 結(jié)論HAdV-3HVR1區(qū)可以插入并展示17個(gè)氨基酸的外源線性表位，并在小鼠內(nèi)誘導(dǎo)免疫反應(yīng)。HVR1區(qū)融合的多個(gè)線性表位連接形成了一個(gè)新的表位并誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生針對(duì)該新表位的免疫反應(yīng)，為在單一的HVR區(qū)插入多個(gè)表位形成多價(jià)疫苗載體的構(gòu)建提供了參考作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 曹倪豪;陳明;;TOB/BTG家族的研究進(jìn)展[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年04期

2 尚超;李巍;富偉能;郭艷;孫開(kāi)來(lái);;喉癌組織Tob基因表達(dá)及其與5-FU化療敏感相關(guān)性的初步探討[J];中華腫瘤防治雜志;2010年08期

3 尚超;李巍;富偉能;孫開(kāi)來(lái);郭艷;;Tob與細(xì)胞周期蛋白D1在喉癌細(xì)胞增殖過(guò)程中調(diào)控關(guān)系的研究[J];山西醫(yī)藥雜志;2010年05期

4 焦e

本文編號(hào)：1349560