本文關(guān)鍵詞：干擾Apg-2基因在BaF3-p210及BaF3-p210-T315I中的作用研究　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： RNA干擾 Apg-2 增殖 凋亡 耐藥

【摘要】：目的熱休克蛋白Apg-2屬HSP70亞家族，廣泛地分布于各種真、原核細(xì)胞，在細(xì)胞增殖和凋亡過(guò)程中發(fā)揮重要作用，但在慢性粒細(xì)胞白血�。╟hronic myeloid leukemia，CML）中的作用尚不清楚。在我們的前期蛋白質(zhì)組學(xué)研究中發(fā)現(xiàn)，H2O2誘導(dǎo)空載質(zhì)粒pMIGR1感染的小鼠前B淋巴細(xì)胞（BaF3-MIGR1）和穩(wěn)定表達(dá)Bcr-Abl融合基因的BaF3-p210細(xì)胞（簡(jiǎn)稱Bp210）損傷過(guò)程中，Apg-2蛋白呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。過(guò)表達(dá)Apg-2基因可促進(jìn)Bp210細(xì)胞增殖，并保護(hù)其免受H2O2誘導(dǎo)的DNA損傷。本課題擬采用RNA干擾技術(shù),在Bp210、Bp210-T315I（耐STI571）及BaF3-MIGR1細(xì)胞內(nèi)靶向抑制Apg-2基因，研究其對(duì)三株細(xì)胞的影響，為CML治療提供一個(gè)新的靶點(diǎn)。 方法（1）構(gòu)建靶向沉默Apg-2基因的shRNA(Hsp41-43)質(zhì)粒及作為陰性對(duì)照的無(wú)序shRNA(HspHK)質(zhì)粒，采用電穿孔方法將shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)入BaF3-MIGR1, Bp210和Bp210-T315I細(xì)胞中，經(jīng)G418加壓培養(yǎng)篩選出Apg-2基因穩(wěn)定抑制的細(xì)胞株，采用RT-PCR和Western-blot檢測(cè)Apg-2mRNA和其蛋白的表達(dá)水平，篩選抑制效果最佳的細(xì)胞株做后續(xù)試驗(yàn)。（2）采用Am-blue和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞儀（FCM）分析細(xì)胞周期；瑞氏染色和FCM檢測(cè)細(xì)胞凋亡，Western-blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bax和Bcl-2蛋白的表達(dá)。（3）STI571處理后，Am-blue和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖，瑞氏染色和FCM檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 結(jié)果（1）成功篩選出穩(wěn)定抑制Apg-2基因的細(xì)胞株BaF3-MIGR1-Hspa42、Bp210-Hspa42以及Bp210-T315I-Hspa42，和轉(zhuǎn)染無(wú)序shRNA的陰性對(duì)照株BaF3-MIGR1-HspaHK、Bp210-HspaHK以及Bp210-T315I-HspaHK。（2）干擾Apg-2表達(dá)可抑制Bcr-Abl陽(yáng)性的Bp210及Bp210-T315I細(xì)胞增殖，但對(duì)BaF3-MIGR1細(xì)胞有促增殖作用；同時(shí)能誘導(dǎo)三株細(xì)胞發(fā)生凋亡。（3）Apg-2的抑制增強(qiáng)了Bp210-T315I對(duì)STI571的敏感性，，細(xì)胞存活率降低，凋亡率增加。 結(jié)論本研究證明干擾Apg-2基因的表達(dá)可抑制Bcr-Abl陽(yáng)性細(xì)胞Bp210及Bp210-T315I的增殖，但對(duì)Bcr-Abl陰性細(xì)胞BaF3-MIGR1的作用卻與此相反。抑制Apg-2的表達(dá)可通過(guò)下調(diào)Bcl-2的表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞凋亡，降低Bp210-T315I對(duì)STI571的耐藥，為進(jìn)一步研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R363

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