本文關(guān)鍵詞：EMPs對(duì)HUVECs的主動(dòng)性作用研究及SELDI篩選差異蛋白的二級(jí)鑒定　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的比較活化和凋亡兩種誘導(dǎo)方式下不同濃度EMPs對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、通透性及成管能力的影響,為探討其在內(nèi)皮細(xì)胞損傷、修復(fù)及相關(guān)功能活動(dòng)中發(fā)揮損傷或保護(hù)的主動(dòng)性作用及其機(jī)制研究提供依據(jù)。 方法采用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,經(jīng)TNF-a活化或A23187凋亡誘導(dǎo),分別提取acEMPs和apEMPs,流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)并檢測(cè)CD62E陽(yáng)性率后,反作用于原細(xì)胞,分別用BrdU細(xì)胞增殖試劑盒、Annexin V凋亡檢測(cè)試劑盒、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell板通透性檢測(cè)、基質(zhì)膠成管實(shí)驗(yàn)評(píng)估105個(gè)／mL、104個(gè)／mL、103個(gè)／mL3個(gè)濃度組acEMPs和apEMPs作用下內(nèi)皮細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、通透性及成管能力的改變,并進(jìn)行組間差異分析。 結(jié)果在定量及表型上,acEMPs與apEMPs之間存在顯著差異,活化組在數(shù)量上和CD62E陽(yáng)性率上均高于凋亡組(p0.05)；對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響：acEMPs表現(xiàn)出促增殖作用,apEMPs為抑制增殖作用,且二者均呈濃度依賴性增高；對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響：acEMPs與apEMPs對(duì)內(nèi)皮凋亡均無(wú)顯著作用；對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力的影響：僅特異性apEMPs能在一定程度上提高內(nèi)皮遷移能力,且該作用僅在104／mL濃度下得以體現(xiàn)；對(duì)血管通透性的影響：凋亡組能大幅度提高內(nèi)皮細(xì)胞單層通透性,且在104／mL濃度下作用最顯著；活化組在低濃度下也起該作用,而高濃度下降低其通透性；對(duì)成血管能力的影響：不同來(lái)源、不同濃度組EMPs均以不同程度降低內(nèi)皮細(xì)胞成管能力,活化組作用更顯著,且與濃度呈正相關(guān),凋亡組作用與濃度呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)論通過多項(xiàng)細(xì)胞功能活動(dòng)指標(biāo)較全面地闡述了EMPs對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的主動(dòng)性作用并提供了量化結(jié)果,確認(rèn)了不同來(lái)源、不同濃度的EMPs在內(nèi)皮細(xì)胞損傷、修復(fù)及相關(guān)功能活動(dòng)中發(fā)揮不同的主動(dòng)性作用,為揭示EMPs保護(hù)或損傷內(nèi)皮細(xì)胞、調(diào)節(jié)血管內(nèi)平衡的功能研究及其進(jìn)一步機(jī)制闡述打下了好的基礎(chǔ)。 目的探討以SELDI蛋白質(zhì)芯片篩選后的細(xì)胞差異表達(dá)蛋白的分離和鑒定方法及其意義。 方法以經(jīng)體外培養(yǎng)及10μM褪黑素藥物干預(yù)的內(nèi)皮祖細(xì)胞差異表達(dá)蛋白質(zhì)為研究對(duì)象,分別采用Tricine-SDS-PAGE和雙向凝膠電泳方法進(jìn)行差異蛋白分離及結(jié)果比較,以FTICR-MS二級(jí)質(zhì)譜鑒定。 結(jié)果經(jīng)Tricine-SDS-PAGE分離后,選取的分子量為53kDa左右的趨勢(shì)性的差異表達(dá)蛋白進(jìn)行FTICR-MS分析,質(zhì)譜鑒定為微管蛋白-a3(吻合度評(píng)分為87)。經(jīng)雙向凝膠電泳分離后,于凝膠近酸性端、分子量在72-95kD之間區(qū)域,選取蛋白表達(dá)量較高的一點(diǎn),質(zhì)譜鑒定其為人熱休克蛋白90-α(吻合度評(píng)分為91) 結(jié)論在本文結(jié)果中,Tricine-SDS-PAGE對(duì)于大致35～70kDa范圍的蛋白分離較清晰、重復(fù)性好,且樣品用量少。2-DE對(duì)最低上樣量有較嚴(yán)格要求,但它能提供分子量、等電點(diǎn)雙重參數(shù)來(lái)更準(zhǔn)確定位所感興趣蛋白點(diǎn),且對(duì)較大分子量蛋白的分離效果更佳。電噴霧傅立葉變換離子回旋共振高分辨質(zhì)譜分辨率高且質(zhì)量穩(wěn)定性較好。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R341

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