本文關(guān)鍵詞：PD-L1在人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞上的表達(dá)及生物學(xué)意義研究　出處：《濱州醫(yī)學(xué)院》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的：通過阻斷PD-L1在人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞(human placenta mesenchymal stem cells, HPMSCs)上的表達(dá),研究其在HPMSCs上表達(dá)的生物學(xué)意義,包括PD-L1對HPMSCs黏附和遷移能力的影響以及在HPMSCs對T細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)中的作用。 方法：(1)細(xì)胞的分離與鑒定：采用酶消化法從健康人胎盤組織中分離細(xì)胞,體外培養(yǎng)3代后用于實驗。免疫熒光標(biāo)記和流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測細(xì)胞表面抗原表達(dá),用FCM及RT-PCR檢測PD-L1的表達(dá)；(2)阻斷PD-L1的表達(dá)：通過脂質(zhì)體途徑將PD-L1siRNA轉(zhuǎn)染入HPMSCs,并用RT-PCR檢測阻斷后PD-L1的基因表達(dá)；(3)HPMSCs的黏附和遷移檢測：阻斷PD-L1的表達(dá)后,細(xì)胞計數(shù)法檢測HPMSCs的黏附率；Transwell法檢測HPMSCs在DMEM-LG完全培養(yǎng)基、DMEM-LG完全培養(yǎng)基(含SDF-1α)、HPMSCs培養(yǎng)上清3種培養(yǎng)條件下的遷移數(shù)量。(4)人外周血單個核細(xì)胞(PBMC)的分離與共培養(yǎng)：用密度梯度離心法分離PBMC,與阻斷PD-L1后的HPMSCs進(jìn)行共培養(yǎng),并用PHA或PMA刺激活化；(5)T細(xì)胞的活化表型、增殖、周期及對細(xì)胞因子分泌的檢測：熒光抗體標(biāo)記法和FCM分析T細(xì)胞早期活化表型CD69的表達(dá)及T細(xì)胞的周期；用CFSE標(biāo)記方法測定T細(xì)胞的增殖；細(xì)胞胞內(nèi)染色法檢測T細(xì)胞對IL-17的分泌。 結(jié)果：(1)胎盤組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞均勻貼壁生長、呈成纖維細(xì)胞狀、表達(dá)CD44、CD105、CD166、而不表達(dá)CD14、CD34和CD45分子。(2)HPMSCs高表達(dá)PD-L1,通過脂質(zhì)體途徑可以將PD-L1siRNA高效轉(zhuǎn)入細(xì)胞,且能有效阻斷PD-L1在細(xì)胞上的表達(dá)。(3)阻斷組細(xì)胞在接種后0.5h的黏附率與未阻斷組無明顯差異,但在接種后1h、3h阻斷組細(xì)胞的黏附率均明顯高于未阻斷組p0.05)；在3種培養(yǎng)條件下,阻斷組細(xì)胞的遷移數(shù)量比未阻斷組顯著減少(p0.01)。(4)阻斷組CD69的表達(dá)與未阻斷組相比無明顯變化；(5)與未阻斷組相比,阻斷組的T細(xì)胞增殖明顯增加,但仍低于單純PMA刺激組；細(xì)胞周期分析結(jié)果顯示,與未阻斷組相比,處于G0/G1期的T細(xì)胞比未阻斷組明顯減少,處于S期的T細(xì)胞明顯增加,但與單純PMA刺激組相比仍有明顯差異；(6)在HPMSCs存在條件下,T細(xì)胞對IL-17的分泌明顯增加,阻斷PD-L1的表達(dá)后,T細(xì)胞對IL-17的分泌進(jìn)一步增加。 結(jié)論：通過siRNA技術(shù)能有效阻斷PD-L1在HPMSCs上的表達(dá)。阻斷PD-L1的基因表達(dá)后,能夠使HPMSCs的黏附能力增強、遷移能力下降,能夠部分逆轉(zhuǎn)HPMSCs對T細(xì)胞的增殖及周期的免疫抑制作用,能夠上調(diào)HPMSCs對T細(xì)胞分泌IL-17的促進(jìn)作用。以上實驗結(jié)果表明,(1)PD-L1參與了HPMSCs的黏附和遷移；(2)PD-L1能夠協(xié)同HPMSCs對T細(xì)胞增殖及周期的抑制作用；(3)HPMSCs上調(diào)CD4+T細(xì)胞對IL-17的分泌作用,但PD-L1可抑制HPMSCs對CD4+T細(xì)胞分泌IL-17的調(diào)節(jié)作用；(4)PD-L1對HPMSCs對T細(xì)胞活化表型CD69的表達(dá)調(diào)節(jié)無明顯影響。
[Abstract]:Objective: by blocking PD-L1 in human placenta derived mesenchymal stem cells (human placenta mesenchymal stem cells, HPMSCs) on the expression and biological significance of its expression in the HPMSCs, including the effect of PD-L1 on HPMSCs adhesion and migration ability and immune function in HPMSCs on T cells in the regulation.
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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2 鄧為民,韓欽,葛薇,尤勝國,李長虹,張偉,鄧鴻業(yè),趙春華;骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞在異基因小鼠免疫器官內(nèi)的分布及其免疫功能調(diào)節(jié)作用[J];中國免疫學(xué)雜志;2004年01期

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本文編號：1347628