本文關(guān)鍵詞：Geminin在大鼠血管平滑肌細(xì)胞分化表型轉(zhuǎn)化中的介導(dǎo)作用　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：一、研究背景 血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cells, VSMCs)表型轉(zhuǎn)化是動(dòng)脈粥樣硬化及血管成形術(shù)后再狹窄等血管疾病發(fā)生發(fā)展關(guān)鍵性的病理過程,但是其發(fā)病機(jī)制仍不甚清楚。目前對(duì)通過細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化進(jìn)而探討再狹窄等疾病發(fā)病機(jī)制的研究越來越受到關(guān)注,對(duì)細(xì)胞周期起始特許阻遏子Geminin的研究已成為熱點(diǎn)。多細(xì)胞動(dòng)物Geminin通過整合細(xì)胞周期和分化在增殖-分化過程中起“開關(guān)”作用。它既能使細(xì)胞穩(wěn)定在分化表型、又能阻抑去分化表型細(xì)胞DNA再復(fù)制,以確�；蜻z傳的穩(wěn)定性。 血管VSMCs通常有兩種不同的表型:合成表型和收縮表型,兩者在一定條件下可以相互轉(zhuǎn)化。正常成人的血管壁VSMCs呈收縮表型。在體外培養(yǎng)或血管壁損傷等情況下,VSMCs可由收縮型轉(zhuǎn)變?yōu)楹铣尚?并向內(nèi)膜遷移、增殖。合成型VSMCs分化程度低或未分化,可以進(jìn)一步分泌細(xì)胞外基質(zhì)和合成血管活性物質(zhì),參與血管壁損傷的修復(fù),并能在生長因子刺激下發(fā)生分裂和增殖。因此VSMCs的表型轉(zhuǎn)化是VSMCs增殖、遷移進(jìn)而形成動(dòng)脈粥樣硬化、再狹窄的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。血清饑餓法可以誘導(dǎo)人血管平滑肌細(xì)胞再分化。分化表型的VSMCs受血清應(yīng)答因子(Serum response factor, SRF)及其輔因子(Myocardin-related transcriptional factor, MRTF)的調(diào)控,SRF是公認(rèn)的調(diào)控VSMCs表型轉(zhuǎn)化的核轉(zhuǎn)錄因子,它通過與CArGbox的結(jié)合,促進(jìn)標(biāo)志性基因表達(dá)而發(fā)揮生理功能。 VSMCs屬于具有增殖潛能的細(xì)胞,它由分化型轉(zhuǎn)變?yōu)槿シ只途褪瞧湓鲋车那疤�。那�?Geminin是否參與此類細(xì)胞增殖-分化調(diào)控?SRF是公認(rèn)的參與VSMCs表型標(biāo)志物調(diào)控的核轉(zhuǎn)錄因子,Geminin是否與SRF有關(guān)?是協(xié)同作用還是拮抗關(guān)系呢?結(jié)合既往的研究成果,我們推測:Geminin基因參與VSMCs表型轉(zhuǎn)化的調(diào)控,而這種作用的發(fā)揮可能與影響SRF轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)有關(guān)。 二、研究目的 主要從分子水平檢測細(xì)胞在不同條件下其表型標(biāo)志物與Geminin之間的關(guān)系,并探討Geminin參與細(xì)胞表型調(diào)控機(jī)制可能系影響SRF表達(dá)所致。 三、研究方法 1.采用形態(tài)學(xué)及免疫組化方法鑒定血管平滑肌細(xì)胞。 2.通過血清刺激誘導(dǎo)細(xì)胞不同表型,檢測不同表型細(xì)胞生物學(xué)功能差異。 3.用Western blot及RT-PCR檢測VSMCs表型標(biāo)志物及Geminin的表達(dá)變化情況。 4.通過阻斷Geminin基因,觀察細(xì)胞形態(tài)、表型標(biāo)志物及SRF表達(dá)的變化。 四、研究結(jié)果 1、血清刺激VSMCs:細(xì)胞表型由收縮型向合成型轉(zhuǎn)化;Geminin mRNA及蛋白表達(dá)逐漸增強(qiáng)。Geminin在血清刺激VSMCs表型轉(zhuǎn)變中,存在基因和蛋白的高表達(dá),證明Geminin與血清刺激所致VSMCs表型轉(zhuǎn)變有關(guān)。 2、通過RNAi,致使Geminin基因及蛋白表達(dá)下調(diào),VSMCs形態(tài)改變,細(xì)胞分化標(biāo)志物表達(dá)下降,去分化標(biāo)志物增加,進(jìn)一步證明Geminin參與了VSMCs表型轉(zhuǎn)變的調(diào)控。 3、RNAi阻斷Geminin表達(dá)后,Geminin核定位差異及SRF表達(dá)出現(xiàn)相應(yīng)改變,提示Geminin對(duì)VSMCs表型轉(zhuǎn)化的調(diào)控作用可能是通過影響SRF表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。 五、結(jié)論 Geminin參與了VSMCs表型轉(zhuǎn)化的調(diào)控,可能通過影響SRF表達(dá)實(shí)現(xiàn)。對(duì)Geminin的干預(yù)有望成為抵抗VSMCs增殖等的手段。
[Abstract]:First, research background
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1345803