本文關(guān)鍵詞：A型肉毒神經(jīng)毒素輕鏈人源性抗體的篩選、表達(dá)與檢測　出處：《軍事醫(yī)學(xué)》2016年05期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的從全合成人源性噬菌體單鏈抗體庫中篩選抗A型肉毒神經(jīng)毒素輕鏈(Bo NT/A LC)特異性單抗,并進(jìn)行全抗的表達(dá)、純化與鑒定。方法根據(jù)大腸桿菌密碼子偏好性優(yōu)化并合成Bo NT/A LC序列,克隆至p TIG質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化BL21(DE3)plys S感受態(tài)細(xì)胞,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后Ni-NTA親和層析純化目的蛋白。利用純化的輕鏈蛋白從噬菌體抗體庫中經(jīng)"吸附-洗脫-擴(kuò)增"程序淘選富集抗體并進(jìn)行特異性篩選。PCR擴(kuò)增抗體輕重鏈可變區(qū)分別連入L293-CL和H293載體,瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染293-F細(xì)胞,培養(yǎng)上清經(jīng)Protein A柱純化,通過SDS-PAGE、Western印跡和ELISA檢測抗體純度和特異性。結(jié)果可溶性表達(dá)的Bo NT/A LC占全菌蛋白的36.8%,純化后蛋白純度達(dá)99%。從噬菌體抗體庫中篩選到10株單抗,選擇其中特異性最好的兩株單抗Lab1、Lab2制備了全抗,Western印跡和ELISA檢測結(jié)果顯示其可特異性識別結(jié)合Bo NT/A LC蛋白。結(jié)論該研究得到了兩株特異性的Bo NT/A LC抗體,可能用于A型肉毒毒素檢測和肉毒中毒治療。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所;沈陽藥科大學(xué)生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院;
【分類號】：R392
【正文快照】： 肉毒神經(jīng)毒素(肉毒毒素,botulinum neurotoxin,Bo NT)是一類由厭氧的肉毒梭菌產(chǎn)生的神經(jīng)毒素,是迄今已知毒性最強(qiáng)的蛋白毒素,其毒性分別是有機(jī)磷神經(jīng)毒劑VX和沙林的1.5萬倍和10萬倍[1]。肉毒毒素包括A~G 7種血清型,其中A、B、E和F能引起人類肉毒中毒,A型最為常見[2]。各型毒素

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9 ;[J];;年期

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