本文關(guān)鍵詞：美洲大蠊幾丁質(zhì)酶基因的原核表達(dá)及蛋白純化　出處：《基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)》2016年09期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：昆蟲幾丁質(zhì)酶是昆蟲幾丁質(zhì)代謝不可或缺的關(guān)鍵酶類。本研究旨在構(gòu)建美洲大蠊幾丁質(zhì)酶Pa Cht1基因原核表達(dá)載體,純化并鑒定Pa Cht1重組蛋白,為后續(xù)酶活等測定奠定基礎(chǔ)。定向克隆Pa Cht1基因成熟肽序列至原核表達(dá)載體pET32a(+)上,將構(gòu)建成功的pET32a-Cht1重組表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入大腸埃希菌Rosetta中,分別對誘導(dǎo)劑IPTG濃度和誘導(dǎo)時間進行優(yōu)化,確定最佳誘導(dǎo)濃度和誘導(dǎo)時間,并對表達(dá)產(chǎn)物進行可溶性分析。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)鎳離子柱純化后通過Western Blot鑒定。結(jié)果表明,美洲大蠊幾丁質(zhì)酶Pa Cht1成熟肽基因編碼區(qū)長1 083 bp,編碼360個氨基酸。最佳誘導(dǎo)濃度和誘導(dǎo)時間分別為0.2 mmol/L和4 h。所得重組蛋白大小約60 k D,與預(yù)期結(jié)果大小一致,重組蛋白主要以包涵體的形式存在。Western Blot鑒定重組蛋白可與6×His-tag單克隆抗體特異性結(jié)合。說明成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET32a-Cht1,并誘導(dǎo)表達(dá)獲得了重組幾丁質(zhì)酶蛋白。
【作者單位】： 貴州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室;貴州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物學(xué)教研室;
【基金】：貴州省科技廳項目黔科合LH字[2015]7363號;貴州省科技廳黔科合LH字[2014]7085號基金共同資助
【分類號】：Q78;R384
【正文快照】： Prokaryotic Expression and Purification of Chitinase Gene of PeriplanetaamericanaLi Hongwei1Wang Jiping2Zhang Di2Zhang Chunlin2*Zhao Wenjing2Zhang Jing2Zhai Suzhen21 Department of Anatomy,Guizhou Medical University,Guiyang,550025;2 Department of Biology,

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