本文關(guān)鍵詞：副溶血弧菌calR的基因敲除株與回補(bǔ)株構(gòu)建　出處：《軍事醫(yī)學(xué)》2016年05期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 副溶血弧菌 calR 突變株 回補(bǔ)株

【摘要】：目的構(gòu)建副溶血弧菌calR的基因突變株和回補(bǔ)株,為研究CalR的功能奠定基礎(chǔ)。方法 PCR擴(kuò)增calR基因的同源臂融合片段,并直接克隆入自殺質(zhì)粒p DS132中。通過接合轉(zhuǎn)移的方式將重組自殺質(zhì)粒轉(zhuǎn)入副溶血弧菌RIMD2210633株(WT)中,利用同源重組的方法替換原始calR基因以構(gòu)建calR無痕突變株(ΔcalR)。PCR擴(kuò)增calR的基因序列,并將其直接克隆入p BAD33質(zhì)粒中,構(gòu)建回補(bǔ)質(zhì)粒。將回補(bǔ)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到ΔcalR中,即得回補(bǔ)株(ΔcalR/calR∷p BAD33)。將vop N的啟動(dòng)子區(qū)克隆入p HRP309質(zhì)粒的β-半乳糖苷酶基因上游,構(gòu)建Lac Z重組質(zhì)粒,并將該重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入WT/p BAD33、ΔcalR/p BAD33和ΔcalR/calR∷p BAD33中,通過測定并比較3株菌中β-半乳糖苷酶活性的差異來判定CalR對(duì)vop N的調(diào)控關(guān)系。結(jié)果與結(jié)論 Lac Z結(jié)果表明,CalR負(fù)調(diào)控vop N的轉(zhuǎn)錄,且回補(bǔ)株的回補(bǔ)效果良好,表明成功構(gòu)建了副溶血弧菌calR基因的突變株和回補(bǔ)株,為后續(xù)對(duì)CalR的功能研究打下了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所病原微生物生物安全國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：江蘇大學(xué)高級(jí)人才科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目(14JDG166) 病原微生物生物安全國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放研究基金資助項(xiàng)目(SKLPBS1438;SKLPBS1437)
【分類號(hào)】：R378;Q78
【正文快照】： 副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一種嗜鹽性革蘭陰性弧菌,廣泛分布于淺海海水及海洋生物中。當(dāng)人們食用了被其污染的海產(chǎn)品時(shí),可能引起以腹瀉、嘔吐、發(fā)熱等為主要癥狀的急性胃腸炎,嚴(yán)重者可導(dǎo)致脫水、休克,甚至死亡[1]。副溶血弧菌可表達(dá)多種致病性毒力因子,如耐熱直

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本文編號(hào)：1330694