發(fā)布時間：2017-12-17 22:03

  本文關(guān)鍵詞：流感疫苗主種子批毒種中外源性禽腺病毒Ⅲ型熒光定量PCR檢測方法的建立及初步應(yīng)用

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【摘要】：目的建立流感疫苗主種子批毒種中外源性禽腺病毒Ⅲ型(egg drop syndrome virus,EDSV)的熒光定量PCR檢測方法,并進(jìn)行驗證及初步應(yīng)用。方法針對EDSV六鄰體蛋白保守區(qū)分別設(shè)計引物和探針,建立熒光定量PCR檢測方法,并驗證該方法的線性、特異性、精密性、靈敏度及可行性。采用新建立的熒光定量PCR法對16株流感疫苗主種子批毒種進(jìn)行外源性EDSV檢測。結(jié)果該方法的最佳線性范圍為1×10~4~1×10~9 copies/μl,回歸曲線為y=-3.385 x+39.616,R~20.99;與其他種屬的腺病毒及流感病毒間均無交叉反應(yīng);試驗內(nèi)和試驗間Ct值的變異系數(shù)(CV)均2%;靈敏度為101 copies/μl;該方法檢測P0代樣品的最低檢測限為10-6摻入體積比例,血清學(xué)方法檢測P0~P3代樣品的最低檢測限為10~(-2)~10~(-3)摻入體積比例。該方法檢測16株流感毒種中外源性EDSV的結(jié)果均為陰性,與血清學(xué)方法檢測結(jié)果一致。結(jié)論成功建立了檢測EDSV的熒光定量PCR法,提高了檢測靈敏度和檢測效率,更好地滿足了流感疫苗應(yīng)急檢驗中快檢的要求。
【作者單位】： 中國食品藥品檢定研究院實驗動物資源研究所;
【基金】：中國食品藥品檢定研究院中青年基金項目(2013NC2)
【分類號】：R392-33
【正文快照】： 目前,接種流感疫苗是預(yù)防流感最有效的方法。由于流感疫苗的制備工藝中需要使用大量雞胚增殖流感病毒,而雞胚本身可能攜帶或感染外源性禽病毒,污染流感病毒,進(jìn)而影響疫苗的安全性,因此,根Corresponding author:YUE Bing-fei,E-mail:y6784@126.com據(jù)《中國藥典》三部(2010版)要

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