本文關鍵詞：新型抗原遞送載體:細胞溶素A融合目的蛋白整合的重組外膜囊泡的構建與鑒定

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【摘要】：細菌外膜囊泡(OMVs)是革蘭氏陰性菌以出芽方式分泌的一種蛋白脂質體,可通過基因工程改造成為外源大分子抗原蛋白的載體。成孔蛋白細胞溶素A(Cly A)可作為引導序列將C-端融合的外源蛋白質定位在菌體及其所分泌的OMVs外膜上。利用Cly A融合蛋白重組的OMVs可介導抗原呈遞,制備疫苗。為驗證這一假說,本研究擬以增強型綠色熒光蛋白(EGFP)為目的蛋白,采用重組技術,構建Cly A-EGFP融合蛋白表達載體,轉化E.coli DH5α,獲得Cly A-EGFP融合蛋白整合的重組細菌OMVs,探索Cly A/EGFP融合蛋白整合的OMVs作為一種制備新型疫苗載體的可行性。重組OMVs分別經(jīng)蛋白酶K和/或EDTA處理后,蛋白質印跡分析顯示,Cly A-EGFP融合蛋白有效地整合在重組的OMVs中,且EGFP呈現(xiàn)于表面。重組OMVs與小鼠巨噬細胞Raw264.7共同孵育后,以EGFP作為標記,熒光顯微鏡觀察顯示,OMVs可被巨噬細胞吞噬、攝取。進而,熒光顯微鏡及流式細胞術分析證明,重組的OMVs可被骨髓來源的樹突狀細胞(BMDCs)有效攝取,并促進BMDCs表達CD86和CD80,說明重組的OMVs可激活樹突狀細胞,促進其成熟。本研究結果提示,利用Cly A融合特異目的蛋白整合的重組OMVs,可作為外源蛋白質的載體,介導抗原呈遞作用,在設計與制備疫苗中具有潛在的應用價值。
【作者單位】： 中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院醫(yī)學生物學研究所;云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點實驗室;云南省重大傳染病疫苗工程技術研究中心;
【基金】：云南省科技計劃項目(No.2016FA049) 北京協(xié)和青年基金和中央高校基本科研業(yè)務費專項資金(No.3332015197;No.3332016117) 北京協(xié)和醫(yī)學院研究生創(chuàng)新基金項目(No.10023-0710-1003);北京協(xié)和醫(yī)學院病原生物研究所基本科研業(yè)務費項目(No.2014IPB107)資助~~
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 云南省科技計劃項目(No.2016FA049);北京協(xié)和青年基金和中央高�；究蒲袠I(yè)務費專項資金(No.3332015197、No.3332016117);北京協(xié)和醫(yī)學院研究生創(chuàng)新基金項目(No.10023-0710-1003)和北京協(xié)和醫(yī)學院病原生物研究所基本科研業(yè)務費項目(No.2014IPB107)資助*聯(lián)系人Tel:0871-6833928，

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