發(fā)布時間：2017-12-13 09:10

  本文關(guān)鍵詞：扎伊爾型埃博拉病毒型特異性標簽序列鑒定及其熒光定量PCR檢測

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【摘要】：目的建立一種快速準確檢測扎伊爾型埃博拉病毒(Zaire ebola virus,ZEBOV)的方法。方法以2014年西非新分離的3株ZEBOV全基因組參考序列及1976年從Mayinga分離的ZEBOV株(NC_002549)為目標,基于Insignia系統(tǒng)算法與GenBank中Nt庫比對,求出ZEBOV特異性核酸標簽序列。設(shè)計引物、TaqMan探針和優(yōu)化反應(yīng)條件,以10倍系列稀釋的陽性質(zhì)粒做標準曲線,做準確性、重復性實驗。并以其余4個亞型的埃博拉病毒、馬爾堡病毒、西尼羅河熱病毒、東方馬腦炎病毒、西方馬腦炎病毒等8種病毒對照及臨床48例患者復雜樣本為對照做特異性檢測。結(jié)果選擇比對得到的特異性標簽序列(KJ660348,11331-11514)設(shè)計探針引物,標準曲線相關(guān)系數(shù)0.99,靈敏度可達5×10~1拷貝。準確性重復性實驗結(jié)果批內(nèi)變異系數(shù)(CV)為0.88%~2.50%、批間CV為1.75%~3.31%。8種病毒及臨床48例患者復雜樣本對照均為陰性。結(jié)論 ZEBOV核酸標簽(KJ660348,11331-11514)在非編碼區(qū),在此基礎(chǔ)上建立的熒光定量PCR方法可特異性檢測ZEBOV,且靈敏、重復性好。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院全軍感染病研究所 感染病研究重慶市重點實驗室;重慶大學計算機學院;解放軍77128部隊;中國科學院計算技術(shù)研究所;
【基金】：全軍后勤科研“十二五”計劃重大項目(AWS11C001) 西南醫(yī)院軍事醫(yī)學預研專項資助課題(SWH2013JS03)~~
【分類號】：R373;R440
【正文快照】： 埃博拉病毒病是由埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)感染引起的一種烈性傳染病,主要以人和非人類靈長類動物易感,致死率高達25%~90%[1-3]。臨床以發(fā)熱及出血為主要特征,表現(xiàn)為急性起病、發(fā)熱、肌痛、出血、皮疹和以肝、腎為代表的多器官損傷[4]。EBOV屬于絲狀病毒科(Filoviridae)

【相似文獻】

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本文編號：1284583