本文關(guān)鍵詞：狨猴血清中重組人5型腺病毒中和抗體滴度的測(cè)定

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【摘要】：目的構(gòu)建表達(dá)熒光素酶與綠色熒光蛋白報(bào)告基因的重組人5型腺病毒r Ad5/Luc/GFP,檢測(cè)血清中和抗體最佳實(shí)驗(yàn)方法,分析小型靈長類動(dòng)物普通棉耳狨猴體內(nèi)腺病毒5型中和抗體水平,為評(píng)價(jià)腺病毒載體疫苗提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。方法利用ADMax包裝系統(tǒng),首先構(gòu)建穿梭質(zhì)粒p DC315-Luc-GFP,將所得的穿梭質(zhì)粒和骨架質(zhì)粒p BHGloxΔE1,3Cre共轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞,進(jìn)行重組人5型腺病毒(r Ad5/Luc/GFP)的包裝。通過3次空斑形成實(shí)驗(yàn)篩選出單克隆重組腺病毒,并在大量擴(kuò)增單克隆腺病毒后用Cs Cl密度梯度離心法進(jìn)行濃縮純化。采用TCID50法測(cè)定純化后病毒滴度,并挑選進(jìn)行中和實(shí)驗(yàn)的最優(yōu)病毒滴度。將合適病毒滴度的r Ad5/Luc/GFP與狨猴血清混合預(yù)孵育后感染293A細(xì)胞,分別采用化學(xué)發(fā)光法及流式細(xì)胞術(shù),對(duì)14只普通棉耳狨猴血清中腺病毒5型中和抗體進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 PCR、酶切和測(cè)序結(jié)果均表明穿梭質(zhì)粒p DC315-Luc-GFP構(gòu)建成功;GFP檢測(cè)結(jié)果證明重組人5型腺病毒r Ad5/Luc/GFP包裝擴(kuò)增成功,病毒滴度可達(dá)6.9×1011.5PFU/m L。兩種不同方法檢測(cè)檢測(cè)14只狨猴的中和抗體結(jié)果一致性較好(P0.05,Kappa=0.811),化學(xué)發(fā)光法或流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)陽性狨猴比率分別為28.6%(4/14)或21.4%(3/14),化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)得其中2只狨猴中和抗體滴度為1/16,另2只為1/32,而流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)得滴度均為1/16。結(jié)論化學(xué)發(fā)光法是一種快速,準(zhǔn)確,適用于多物種的方法,其靈敏度略高于以GFP為報(bào)告基因的流式細(xì)胞術(shù)(7.2%)。普通棉耳狨猴體內(nèi)Ad5血清陽性率較低,有望應(yīng)用基于此型或其他型別腺病毒作為載體進(jìn)行基因治療和基因疫苗研究。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)輸血醫(yī)學(xué)系;深圳市易瑞生物技術(shù)有限公司;
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金(31500134) 廣州市產(chǎn)學(xué)研協(xié)同創(chuàng)新重大專項(xiàng)(201508020061) 廣州市珠江科技新星專項(xiàng)(201506010075) 廣東省教育廳青年創(chuàng)新人才類項(xiàng)目(2014KQNCX048) 南方醫(yī)科大學(xué)優(yōu)秀青年教師培育計(jì)劃 深圳市食品安全快速檢測(cè)技術(shù)工程中心(GCZX20140509163151273)~~
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 普通棉耳狨猴(Callithrix jacchus)是新大陸猴,屬靈長目狨猴科,地理分布上只分布在南美巴西的中部和東北部的大西洋沿岸。具有體型小、易管理、經(jīng)濟(jì)性好、繁殖率高的靈長類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的優(yōu)點(diǎn),近年來作為動(dòng)物模型已應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的多項(xiàng)研究[1-2]。隨著分子生物技術(shù)的迅猛發(fā)

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孔先坤;劉曉寧;沈琴芳;朱林根;黃水興;沈文斌;;腺病毒載體的研究概況[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2008年02期

2 邊曄;馮飛雪;夏海濱;;腺病毒載體衣殼蛋白質(zhì)的遺傳修飾[J];生命的化學(xué);2010年01期

3 黎皓;人腺病毒載體的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).病毒學(xué)分冊(cè);1998年02期

4 邱峰;陳世知;陳虹;;新型腺病毒載體的制備及其特性研究[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2006年03期

5 趙奕,殷震,朱平;無病原性腺病毒載體構(gòu)建的研究[J];獸醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1989年04期

6 張德禮;腺病毒載體構(gòu)建及在疫苗研制上的應(yīng)用[J];生物技術(shù)通報(bào);1992年11期

7 劉雪豐,張連峰,王麗華,蔡有余;腺病毒載體有效性和安全性的改進(jìn)[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;1998年04期

8 王崇全,王家寧,黃永章,陳霞平,劉志祥,周芳;攜帶人VEGF165的腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2002年03期

9 楊世昕,吳軍,羅高興,易紹萱,賀偉峰,黃赤兵,周立新,李彥,張寧,陳希煒,張小蓉;一種從培養(yǎng)上清獲得高滴度腺病毒的方法[J];中國醫(yī)學(xué)生物技術(shù)應(yīng)用;2004年01期

10 馮波;李青旺;肖波;韓增勝;支旭勃;;重組人神經(jīng)生長因子β腺病毒的構(gòu)建及鑒定[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年02期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 周榮;田新貴;;人3型腺病毒抗原表位展示載體及應(yīng)用[A];新發(fā)傳染病研究熱點(diǎn)研討會(huì)論文集[C];2012年

2 劉旭平;徐佳t，

本文編號(hào)：1269971