發(fā)布時(shí)間：2017-12-06 07:21

  本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)染siat7e基因的MDCK細(xì)胞懸浮性狀分析與質(zhì)控

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【摘要】：目的分析轉(zhuǎn)染siat7e基因的MDCK細(xì)胞(MDCK-siat7e)的懸浮特性,并建立相關(guān)質(zhì)控方法。方法將MDCKsiat7e細(xì)胞接種無血清培養(yǎng)基BD001,37℃,130 r/min振搖培養(yǎng)11 d,顯微鏡觀察不同培養(yǎng)時(shí)間細(xì)胞形態(tài),并檢測細(xì)胞生長濃度、活力及代謝狀況。提取MDCK-siat7e細(xì)胞的m RNA,采用RT-PCR法擴(kuò)增siat7e基因片段并測序。通過Real time PCR法檢測不同代次(原代、10、20、30代)MDCK-siat7e細(xì)胞siat7e基因的表達(dá)量。結(jié)果 MDCK-siat7e細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中呈懸浮生長狀態(tài),細(xì)胞接種培養(yǎng)初期生長較慢,但活力較好;然后細(xì)胞生長經(jīng)停滯期進(jìn)入生長期,細(xì)胞生長加快且活力大于98%,細(xì)胞濃度達(dá)峰點(diǎn)后生長進(jìn)入平臺(tái)期;培養(yǎng)后期細(xì)胞濃度降低且活力下降。原代與傳代細(xì)胞siat7e基因序列測定結(jié)果與Gen Bank公布的ST6Gal Nac V序列(AJ507292.1)一致。MDCK-siat7e細(xì)胞傳至30代,仍可表達(dá)siat7e,表明外源siat7e基因整合入MDCK細(xì)胞基因組中,并隨MDCK細(xì)胞傳代持續(xù)地轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)對(duì)siat7e基因的定性及表達(dá)量的分析可用于MDCK-siat7e細(xì)胞懸浮性的檢測,為其作為疫苗用細(xì)胞基質(zhì)的質(zhì)量監(jiān)控提供了依據(jù)。
【作者單位】： 蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司;
【分類號(hào)】：R392;Q813.11
【正文快照】： 現(xiàn)行人用病毒性疫苗多數(shù)是通過細(xì)胞培養(yǎng)方法制備。MDCK細(xì)胞是培養(yǎng)和分離病毒的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系之一,具有易培養(yǎng),增殖快,對(duì)病毒易感等特點(diǎn)。但貼壁培養(yǎng)限制了疫苗的產(chǎn)量,由貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)換成懸浮生長可簡化生產(chǎn)過程,將貼壁細(xì)胞進(jìn)行懸浮馴化培養(yǎng)成為疫苗生產(chǎn)的需求。siat7e基因編碼

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1 張啟龍;陳小云;王棟;;共表達(dá)siat7e和st3galⅠ基因MDCK細(xì)胞株的建立[J];中國獸藥雜志;2014年03期

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1 張啟龍;穩(wěn)定表達(dá)siat7e和st3galI基因MDCK細(xì)胞株的建立[D];中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;2014年

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本文編號(hào)：1257802