本文關(guān)鍵詞：李斯特菌載體結(jié)核疫苗候選株基因重組構(gòu)建及蛋白表達(dá)驗(yàn)證

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【摘要】：目的基因重組構(gòu)建以單增李斯特菌、綿羊李斯特菌為載體的新型結(jié)核疫苗候選株,并進(jìn)行蛋白表達(dá)驗(yàn)證,為結(jié)核疫苗研究和結(jié)核防控提供新思路和新方法。方法以體外基因連接、質(zhì)粒轉(zhuǎn)化等技術(shù),將本實(shí)驗(yàn)室已有的分別編碼結(jié)核抗原Ag85C、ESAT-6蛋白的兩種基因盒,插入攜帶單增李斯特菌、綿羊李斯特菌同源序列的打靶質(zhì)粒中。將打靶質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化單增李斯特菌、綿羊李斯特菌,在42℃和30℃連續(xù)傳代,利用同源重組雜交原理和基因打靶技術(shù),將打靶質(zhì)粒攜帶的兩種編碼結(jié)核抗原的抗原基因盒,分別整合至致病基因(actA和plcB)被敲除的單增李斯特菌、綿羊李斯特菌減毒株及未經(jīng)減毒的綿羊李斯特菌基因組中。重組菌經(jīng)藍(lán)白斑、抗生素抗性及PCR篩選,再經(jīng)Western blot檢測(cè)其菌體蛋白及分泌蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果構(gòu)建了攜帶抗原基因盒的重組菌株5株,其重組基因序列PCR驗(yàn)證結(jié)果均符合預(yù)期,且測(cè)序驗(yàn)證成功;重組菌不攜帶紅霉素抗性基因,表型特征符合預(yù)期;其中,重組菌Li-Rv0129c、Li-ΔactAplcB-Rv0129c按預(yù)期表達(dá)了結(jié)核桿菌Ag85C抗原蛋白,Li-ΔactAplcBRv3875按預(yù)期表達(dá)了結(jié)核桿菌ESAT-6抗原蛋白,Lm重組菌未表達(dá)相應(yīng)結(jié)核抗原蛋白。結(jié)論成功構(gòu)建并篩選得到3株以綿羊李斯特菌為載體的、攜帶結(jié)核桿菌Rv0129c(編碼Ag85C)抗原基因盒或Rv3875(編碼ESAT-6)抗原基因盒,且表達(dá)相應(yīng)抗原蛋白的新型結(jié)核疫苗候選株。
【作者單位】： 四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫系;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(No.31570924)資助
【分類號(hào)】：R392-33
【正文快照】： 我國是全球22個(gè)結(jié)核病(tuberculosis,TB)高負(fù)擔(dān)國家之一。卡介苗(bacillus calmette-guerin,BCG)是目前唯一的TB疫苗,但其保護(hù)效果極不穩(wěn)定,其保護(hù)力在0%~80%不等[1],約在接種10~15年后免疫效果開始逐漸減弱,新的TB疫苗亟待研發(fā)。以減毒李斯特菌為載體的重組疫苗,因能誘導(dǎo)強(qiáng)效

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