本文關(guān)鍵詞：人LOX-1基因畢赤酵母表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)研究

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【摘要】：目的構(gòu)建血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體-1(LOX-1)真核表達(dá)載體,篩選高表達(dá)菌株,為體外獲得有活性重組蛋白奠定基礎(chǔ)。方法以實(shí)驗(yàn)室保存的含有人源LOX-1基因的質(zhì)粒為模板PCR擴(kuò)增LOX-1基因,經(jīng)過(guò)TA克隆后亞克隆至酵母表達(dá)載體p PICZαA,將獲得的重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化至畢赤酵母X-33,利用原位雙膜法快速檢測(cè)陽(yáng)性高表達(dá)菌株,最后經(jīng)過(guò)甲醇誘導(dǎo),采用Western blot檢測(cè)LOX-1的表達(dá)。結(jié)果成功構(gòu)建LOX-1真核表達(dá)載體,雙膜法篩選到高表達(dá)菌株;Western blot結(jié)果顯示,LOX-1在上清中得到表達(dá)。結(jié)論 LOX-1基因在畢赤酵母細(xì)胞上清中得到表達(dá),為體外獲得活性重組蛋白和研究其致動(dòng)脈粥樣硬化功能奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院糖脂代謝重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81202536) 遼寧省大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練項(xiàng)目(201511258040)
【分類號(hào)】：R3416
【正文快照】： 血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體-1(lectin-likeoxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)屬于E類清道夫家族成員,是C型植物凝集素樣Ⅱ型跨膜蛋白,由273個(gè)氨基酸組成[1]。在結(jié)構(gòu)上由1個(gè)短的N端細(xì)胞質(zhì)區(qū),單鏈跨膜區(qū),細(xì)胞外區(qū)域和1個(gè)C端血凝素樣配基連接區(qū)4個(gè)部分組成[，

本文編號(hào)：1214943