本文關(guān)鍵詞：B群腦膜炎奈瑟菌NMB0315核酸疫苗與重組蛋白疫苗聯(lián)合免疫效果初探

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【摘要】：[目的]初步探討和評(píng)價(jià)NMB0315核酸疫苗、重組蛋白疫苗及核酸疫苗+重組蛋白疫苗聯(lián)合免疫誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異性體液/細(xì)胞免疫應(yīng)答水平及其免疫保護(hù)效果,為研制高效B群流腦疫苗提供可靠實(shí)驗(yàn)依據(jù)。[方法]1.對(duì)本課題組保存的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/NMB0315進(jìn)行鑒定后,大量制備并純化;肌肉注射免疫雌性BALB/c小鼠,采用間接ELISA法檢測(cè)免疫小鼠血清中特異性IgG、生殖道黏膜分泌物中特異性s IgA抗體水平及免疫小鼠脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ、IL-4含量,CCK8法測(cè)定小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖刺激指數(shù)(SI);2.對(duì)本課題組保存的含原核重組質(zhì)粒pET-30a/NMB0315的E.coli BL21誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白;腹腔注射免疫雌性BALB/c小鼠,分析其誘導(dǎo)的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答水平。3.大量制備NMB0315核酸疫苗和重組蛋白疫苗,采用核酸初免-蛋白加強(qiáng)(DNA prime-protein boost)方法,聯(lián)合免疫雌性BALB/c小鼠,測(cè)定特異性體液/細(xì)胞免疫應(yīng)答水平、免疫血清體外殺菌效價(jià),觀察聯(lián)合免疫對(duì)感染B群腦膜炎球菌小鼠的免疫保護(hù)效果。[結(jié)果]1.NMB0315核酸疫苗具有良好的免疫原性,免疫小鼠血清特異性Ig G水平及生殖道黏膜sIg A水平隨免疫時(shí)間呈上升趨勢(shì),免疫后第八周抗體效價(jià)分別為1:45,000和1:30,000,明顯高于對(duì)照組PBS、pcDNA3.1(+)、CpG(P0.01);小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖刺激指數(shù)SI(2.112±0.342)、細(xì)胞因子IFN-γ(142.31±19.45 pg/mL)及IL-4(178.04±18.38 pg/mL)水平均明顯高于對(duì)照組pbs、pcdna3.1(+)、cpg(p0.01)。2.nmb0315蛋白疫苗誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生了高水平的體液免疫應(yīng)答,特異性igg水平隨免疫時(shí)間呈升高趨勢(shì),第8周效價(jià)達(dá)1:180,000;siga水平也呈升高趨勢(shì),第8周效價(jià)為1:40,000;免疫第八周與體液免疫有關(guān)的細(xì)胞因子il-4含量為248.47±23.37pg/ml,與細(xì)胞免疫有關(guān)的ifn-γ含量為198.12±20.02pg/ml,小鼠脾細(xì)胞刺激指數(shù)si為1.631±0.062,上述免疫指標(biāo)均明顯高于pbs和fa對(duì)照組(p0.01)。3.核酸初免-蛋白加強(qiáng)的聯(lián)合免疫誘導(dǎo)的血清特異性igg,igg1,igg2a,igg2b和igg3水平及生殖道灌洗液中特異性siga水平在第八周達(dá)到峰值,抗體效價(jià)分別為1:150,000、1:70,000、1:50,000、1:22,000、1:45,000、1:30,000,脾淋巴細(xì)胞誘生的il-4含量為219.58±20.01pg/ml,上述與體液免疫相關(guān)指標(biāo)均較單一重組蛋白疫苗組低(p0.05);小鼠脾淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)(si:2.185±0.086)及ifn-γ(226.60±22.76pg/ml)這些與細(xì)胞免疫有關(guān)的指標(biāo)均明顯高于重組蛋白疫苗組(p0.05);核酸疫苗組、重組蛋白疫苗組和聯(lián)合免疫疫苗組免疫血清在補(bǔ)體介導(dǎo)下的體外殺菌效價(jià)分別為1:64、1:128和1:128,72小時(shí)內(nèi)對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠的免疫保護(hù)率分別為70%、95%和80%。4.免疫2、4、6、8w時(shí),核酸疫苗組、重組蛋白疫苗組和聯(lián)合免疫疫苗組igg2a/igg1比值均小于1。[結(jié)論]1.nmb0315疫苗誘導(dǎo)體液免疫(包括黏膜免疫)的效果為:重組蛋白疫苗組聯(lián)合免疫疫苗組核酸疫苗組;誘導(dǎo)細(xì)胞免疫的效果為:聯(lián)合免疫疫苗組核酸疫苗組重組蛋白疫苗組;2.nmb0315疫苗72小時(shí)內(nèi)對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠的免疫保護(hù)效果為:重組蛋白疫苗組聯(lián)合免疫疫苗組核酸疫苗組。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R392

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