本文關(guān)鍵詞：高效陰離子交換色譜-脈沖安培檢測(cè)法測(cè)定b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗多糖及游離多糖的含量

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【摘要】：目的:建立高效陰離子交換色譜-脈沖安培檢測(cè)法(HPAEC-PAD)測(cè)定b型流感嗜血桿菌(Hib)結(jié)合疫苗的多糖及游離多糖含量。方法:將疫苗中的有效抗原成分—Hib多糖,其結(jié)構(gòu)為多聚磷酸核糖基核糖醇(polyribosylribitol phosphate,PRP),用6 mol·L~(-1)鹽酸進(jìn)行水解,得到其核糖醇(ribitol)單體;使用Carbo Pac~?MA1陰離子交換柱(4 mm×250 mm),以580 mmol·L~(-1)氫氧化鈉溶液為流動(dòng)相,流速為0.4 m L·min~(-1),柱溫35℃,進(jìn)樣體積100μL,脈沖安培檢測(cè)器收集信號(hào),核糖醇的含量以峰面積計(jì)算得到,再根據(jù)核糖醇占PRP干重的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(41.3%),計(jì)算出Hib結(jié)合疫苗中PRP及游離多糖(Free PRP)的含量,并評(píng)估該方法的重復(fù)性和再現(xiàn)性。結(jié)果:核糖醇質(zhì)量濃度在0.075~1.05μg·mL~(-1)范圍內(nèi),與峰面積響應(yīng)值呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 9),最低檢測(cè)限為2.5 ng·mL~(-1);標(biāo)準(zhǔn)品供試溶液連續(xù)進(jìn)樣6次,峰面積及保留時(shí)間的RSD均小于5%;核糖醇加標(biāo)回收率在80%~120%之間;對(duì)來(lái)自5個(gè)企業(yè)的4個(gè)不同批次的Hib結(jié)合疫苗的PRP及Free PRP含量進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果均符合規(guī)定。結(jié)論:本方法在測(cè)定Hib結(jié)合疫苗的PRP及Free PRP含量時(shí),樣品前處理簡(jiǎn)單,分離效果好,且靈敏度高,結(jié)果穩(wěn)定,可靠,對(duì)控制該疫苗的質(zhì)量具有重要意義。
【作者單位】： 中國(guó)食品藥品檢定研究院呼吸道細(xì)菌疫苗室衛(wèi)生部生物技術(shù)產(chǎn)品檢定方法及其標(biāo)準(zhǔn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)(編號(hào):2012AA02A402)
【分類號(hào)】：R392-33
【正文快照】： b型流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)結(jié)合疫苗,系用純化的b型流感嗜血桿菌多糖,其結(jié)構(gòu)為多聚磷酸核糖基核糖醇(polyribosylribitollphosphate,PRP),共價(jià)與載體蛋白連接而成[1]。接種后,可使機(jī)體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答,誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生有效的保護(hù)性殺菌抗體。歐美等12

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本文編號(hào)：1191734