本文關(guān)鍵詞：小反芻獸疫病毒H蛋白的原核表達及其多克隆抗體的制備

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【摘要】：目的對小反芻獸疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)弱毒疫苗株血凝素蛋白(H)主要抗原表位區(qū)進行克隆及原核表達,并制備鼠抗PPRV H蛋白多克隆抗體。方法根據(jù)Gen Bank中登錄的PPRV弱毒疫苗株H基因序列設(shè)計引物,RT-PCR擴增其主要抗原表位區(qū)域(去掉信號肽及跨膜區(qū));將擴增產(chǎn)物克隆至表達載體p ET-30a(+)后,轉(zhuǎn)化E.coli Transetta(DE3),經(jīng)IPTG 37℃誘導表達目的蛋白;表達的目的蛋白經(jīng)帶His標簽的鎳離子蛋白純化柱純化后,進行SDS-PAGE及Western blot鑒定;將純化的H蛋白與弗氏佐劑混合乳化后免疫昆明鼠,3次免疫2周后采血,分離血清,制備鼠抗PPRV H蛋白多克隆抗體,采用間接免疫熒光試驗進行鑒定。結(jié)果質(zhì)粒p ET-30a(+)-H經(jīng)雙酶切鑒定證明構(gòu)建正確;表達的目的蛋白相對分子質(zhì)量約60 000,能同時被抗His標簽抗體和PPRV陽性綿羊血清識別,主要以包涵體形式存在,表達量約占菌體總蛋白的48%,純度可達90%以上;制備的多克隆抗體能夠識別PPRV全病毒抗原以及桿狀病毒表達的重組PPRV H蛋白。結(jié)論成功構(gòu)建了質(zhì)粒p ET-30a(+)-H,并表達了PPRV H蛋白,制備的鼠源多克隆抗體為建立針對PPRV H蛋白的ELISA抗體檢測方法及研制新型亞單位疫苗奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學科學院軍事獸醫(yī)研究所吉林省人獸共患病預防與控制重點實驗室;吉林大學動物醫(yī)學學院;吉林農(nóng)業(yè)大學動物科技學院;江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：國家科技支撐計劃(2015BAD12B04)
【分類號】：R392-33
【正文快照】： 小反芻獸疫(peste des petits ruminants,PPR)是由PPR病毒(PPR virus,PPRV)引起的急性或亞急性傳染病,主要危害山羊、綿羊、羚羊等小反芻動物,而綿羊與山羊較易感,其中山羊高度易感,嚴重時發(fā)病率可達100%[1-2]。世界動物衛(wèi)生組織(Office Inte-rnational Des Epizooties,OIE)將

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