發(fā)布時(shí)間：2017-11-12 10:12

  本文關(guān)鍵詞：左旋咪唑增強(qiáng)金黃色葡萄球菌凝集因子A亞單位疫苗免疫效果的研究

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【摘要】：金黃色葡萄球菌是一種條件致病菌,能引起多種嚴(yán)重疾病。由于抗生素治療金黃色葡萄球菌疾病產(chǎn)生嚴(yán)重的耐藥性,開發(fā)金黃色葡萄球菌疫苗已迫在眉睫,其中亞單位蛋白疫苗在金黃色葡萄球菌疾病預(yù)防中居于重要地位。但由于蛋白疫苗在激活細(xì)胞免疫應(yīng)答水平有限,目前,篩選合適的能增強(qiáng)細(xì)胞免疫應(yīng)答的佐劑來(lái)加強(qiáng)亞單位蛋白疫苗的免疫效果是一種新型的免疫策略。左旋咪唑(Levamisole, LMS)是一種低分子量的化合物,且能夠激發(fā)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答。同時(shí)金黃色葡萄球菌凝集因子A (Clumping factorA, ClfA)是金黃色葡萄球菌重要的黏附因子,被認(rèn)為是開發(fā)新型疫苗的理想候選抗原。本實(shí)驗(yàn)將左旋咪唑作為佐劑與金黃色葡萄球菌亞單位疫苗ClfA共同免疫小鼠,觀察其是否能夠增強(qiáng)金黃色葡萄球菌蛋白疫苗的免疫效果。實(shí)驗(yàn)中首先對(duì)C1fA活性片段進(jìn)行擴(kuò)增,構(gòu)建pGEX-4T-1-ClfA重組原核表達(dá)載體,并在大腸桿菌BL21 (DE3)內(nèi)誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)SDS-PAGE與Western Blot對(duì)重組蛋白進(jìn)行分析鑒定。重組蛋白經(jīng)過純化后,與LMS進(jìn)行配伍免疫小鼠,ELISA法檢測(cè)免疫后血清抗體IgG及其亞型IgG1和IgG2a的滴度；CFSE染色法檢測(cè)T細(xì)胞增殖活性,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+-IFN-γ、D4+-IL-17和CD8+-IFN-y細(xì)胞分度,ELISA法檢測(cè)小鼠脾細(xì)胞上清中IFN-γ、IL-4和IL-17A細(xì)胞因子的分泌量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,左旋咪唑作為佐劑與亞單位疫苗ClfA共同免疫小鼠后,LMS+ClfA組抗體效價(jià)最高、且與ClfA組相比差異顯著(P0.05),分析IgG抗體各亞型,發(fā)現(xiàn)ClfA組IgG抗體亞型主要以IgG1為主；LMS+ClfA組抗體形式以IgG2a為主；脾臟淋巴細(xì)胞上清細(xì)胞因子檢測(cè)發(fā)現(xiàn),LMS+ClfA組與ClfA組相比,細(xì)胞因子IFN-γ和IL-17A分泌量升高,差異顯著(P0.05)。在胞內(nèi)細(xì)胞因子染色實(shí)驗(yàn)中,LMS+ClfA組CD4+T細(xì)胞IFN-γ的表達(dá)量升高,與單獨(dú)免疫ClfA組相比,二者差異顯著(P0.05); LMS+ClfA組CD8+T細(xì)胞中IFN-γ的表達(dá)量相比ClfA組顯著升高(P0.01), LMS+ClfA組與ClfA組相比,CD4+T細(xì)胞表達(dá)IL-17的量也增高,組間差異顯著(P0.05)。結(jié)果表明,LMS不僅可以顯著增強(qiáng)亞單位疫苗ClfA誘導(dǎo)的體液免疫反應(yīng),而且提高了機(jī)體Thl型細(xì)胞免疫應(yīng)答水平,同時(shí),一定程度上激發(fā)了機(jī)體Th17型細(xì)胞免疫應(yīng)答。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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本文編號(hào)：1175460