本文關(guān)鍵詞：冠心病氣虛血瘀證病證結(jié)合大鼠模型的建立與評(píng)價(jià)

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【摘要】：研究背景冠心病(Coronary Heart Disease,CHD)是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的簡(jiǎn)稱,亦稱為缺血性心臟病。心血管疾病是目前導(dǎo)致人類死亡與殘疾的三大主要疾病之首,嚴(yán)重危害人類健康。祖國(guó)醫(yī)學(xué)雖無(wú)冠心病的病名,但根據(jù)癥狀多屬于中醫(yī)學(xué)的“胸痹”、“真心痛”、“厥心痛”等范疇。冠心病中醫(yī)證型按虛實(shí)均可歸為本虛標(biāo)實(shí)、本虛和標(biāo)實(shí)三大類。本虛標(biāo)實(shí)屬常見(jiàn)證型,近年我國(guó)人民生活方式的改變導(dǎo)致氣虛、血瘀兩種證候要素在冠心病證候要素中所占比例逐漸升高。目前對(duì)于冠心病氣虛血瘀證動(dòng)物模型的研究已經(jīng)有了一些進(jìn)展,但在造模方法以及模型評(píng)價(jià)體系上仍然不夠成熟與臨床差距較大,尚無(wú)公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)范化的模型建立和評(píng)價(jià)方法。研究冠心病氣虛血證的發(fā)病機(jī)制和其證候的物質(zhì)基礎(chǔ)急需建立一種穩(wěn)定性高、重復(fù)性好的動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)室在建立各類動(dòng)物模型的探索過(guò)程當(dāng)中,逐步形成了“病證結(jié)合動(dòng)物模型擬臨床”這一概念,并在其指導(dǎo)下成功建立十余種病證結(jié)合動(dòng)物模型,因此本課題在前人研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探索冠心病氣虛血瘀證動(dòng)物模型的建立并構(gòu)建其評(píng)價(jià)體系。本研究對(duì)于揭示中醫(yī)證候物質(zhì)基礎(chǔ),開(kāi)發(fā)治療冠心病的新藥和有效中藥的篩選,闡明中藥復(fù)方作用機(jī)制具有十分重要的理論和應(yīng)用意義。第一部分：冠心凸病氣虛血瘀證病證結(jié)合大鼠模型建立方法的探索1.研究目的通過(guò)不同模型建立方法比較確立穩(wěn)定的冠心病氣虛血瘀證大鼠模型的建立方法。2.材料和方法選用雄性WISTAR大鼠隨機(jī)分6組:A.空白組(CON)：正常飲食飲水n=8；B.假手術(shù)組(SHAM):開(kāi)胸、穿線但不結(jié)扎n=8;C.單純結(jié)扎冠脈模型組(L)：正常飼養(yǎng)2周后單純結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支n=8;D.多因素復(fù)合模型組：d1：疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合結(jié)扎冠脈模型組(EL)：疲勞運(yùn)動(dòng)2周+結(jié)扎冠脈,手術(shù)恢復(fù)3天后維持大鼠力竭運(yùn)動(dòng)(1次/2天)n=8；d2:控食復(fù)合結(jié)扎冠脈模型組(DL)：控食2周+結(jié)扎冠脈,手術(shù)恢復(fù)3天后繼續(xù)控制飲食n=7；d3：控食、疲勞運(yùn)動(dòng)雙因素復(fù)合結(jié)扎冠脈模型組(DEL)：控食2周+疲勞運(yùn)動(dòng)2周+結(jié)扎冠脈,手術(shù)恢復(fù)3天后維持大鼠力竭運(yùn)動(dòng)(1次/2天),控制飲食n=5。6周造模結(jié)束后觀察大鼠宏觀體征,分別采集大鼠超聲心動(dòng)檢測(cè)指標(biāo)、呼吸幅度對(duì)大鼠冠心病氣虛血瘀證的主癥進(jìn)行評(píng)價(jià)；采集空?qǐng)鰧?shí)驗(yàn)相關(guān)指標(biāo)、力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間、足底圖像色彩飽和度對(duì)兼癥進(jìn)行評(píng)價(jià)；采集舌面色彩飽和度對(duì)舌象進(jìn)行評(píng)價(jià)；采集脈搏搏動(dòng)幅度對(duì)脈象進(jìn)行評(píng)價(jià)。同時(shí)對(duì)心臟結(jié)構(gòu)與功能、血管內(nèi)皮功能、能量代謝水平、心肌組織病理檢查等相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。3.研究結(jié)果3.1.1一般情況：DL、EL、DEL與SHAM比較體重分別下降38.3%、10.6%、45.3%(P0.01),L與SHAM比較體重下降2.6%(P0.05)；DL、EL、DEL與L比較體重分別顯著下降36.6%、8.2%、43.9%(P0.05 P0.01)。3.1.2心臟結(jié)構(gòu)與功能：DL、EL、DEL、L與SHAM比較射血分?jǐn)?shù)分別下降71.4%、62.4%、71.6%、49.4%(P0.01),短軸縮短率分別下降77.2%、69.2%、77.5%、57.9%(P0.01),左室舒張末內(nèi)徑分別擴(kuò)大29.2%、36.6%、31.7%、19.8%(P0.01),左室收縮末內(nèi)徑分別擴(kuò)大123.9%、122.6%、124.4%、83.6%(P0.01),左室舒張末容積分別擴(kuò)張76.7%、99.3%、83.7%、50.7%(P0.01),左室收縮末容積分別擴(kuò)張525.7%、515.9%、522.6%、303.8%(P0.01)；DL、DEL與L比較短軸縮短率分別顯著下降45.9%、46.6%(P0.01),EL與L比較短軸縮短率下降26.9%(P0.05),DL、EL、DEL與L比較射血分?jǐn)?shù)分別下降43.4%、25.6%、43.9%(P0.05 P0.01),左室舒張末內(nèi)徑分別擴(kuò)大7.8%、14%、9.9%(P0.05 P0.01),左室收縮末內(nèi)徑分別擴(kuò)大22%、21.2%、22.2%(P0.01)左室舒張末容積分別擴(kuò)張17.3%、32.3%、21.9%(P0.05 P0.01),左室收縮末容積分別擴(kuò)張55%、52.5%、54.2%(P0.05)3.1.3生物學(xué)相關(guān)指標(biāo)：四種模型與SHAM比較血清BNP、NT-proBNP、ET、 ATP synthase含量升高(P0.05 P0.01),NO含量下降(P0.01)。DL、EL、DEL與SHAM比較6Keto-PGF1α/TXB2比值下降(P0.05 P0.01),L與SHAM比較6Keto-PGF1α/TXB2比值下降(P0.05)。DL、EL、DEL與L比較BNP、ET、ATP synthase含量升高(P0.01),NO含量、6Keto-PGF1α/TXB2比值下降(P0.01)。3.1.4心肌病理組織觀察：心肌MASSON、HE染色和電鏡觀察,CON、SHAM組心肌組織正常,其余模型組心肌出現(xiàn)不同程度病理性改變。3.1.5證候特征表現(xiàn)：與SHAM比較,L主癥有表現(xiàn),EL、DL、DEL主癥表現(xiàn)明顯,相關(guān)指標(biāo)發(fā)生顯著改變(P0.05 P0.01)；L、EL兼癥有表現(xiàn),DL、 DEL兼癥表現(xiàn)明顯,空?qǐng)鰧?shí)驗(yàn)相關(guān)指標(biāo)、力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間、足底色彩飽和度發(fā)生顯著改變(P0.05 P0.01)；四個(gè)模型組與SHAM比較舌象發(fā)生改變(P0.05P0.01),DEL改變最明顯；四個(gè)模型組與SHAM比較脈象發(fā)生改變(P0.05P0.01),DL、EL、DEL改變明顯。4.結(jié)論(1)純單純結(jié)扎冠脈方法(L)以及多因素復(fù)合方法(DL、EL、DEL)都可以成功建立冠心病氣虛血瘀證大鼠模型。(2)采用復(fù)合因素建立的模型(DL、EL、DEL)與通過(guò)單純結(jié)扎冠脈建立的模型(L)比較臨床病因?qū)W基礎(chǔ)以及與中醫(yī)相關(guān)理論體系的聯(lián)系更密切,在完整體現(xiàn)中醫(yī)證候的特征方面具有一定的優(yōu)勢(shì)。(3)三種復(fù)合因素建立的模型當(dāng)中,通過(guò)疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合結(jié)扎冠脈(EL)的方法建立的模型與其他兩種方法建立的模型(DL、DEL)比較更符合臨床實(shí)際發(fā)病的原因與特征,是一種條件可控、重復(fù)性好的冠心病氣虛血瘀證病證結(jié)合大鼠模型。第二部分：冠心病氣虛血瘀證發(fā)展過(guò)程研究及益氣活血藥的干預(yù)作用1.研究目的通過(guò)動(dòng)態(tài)觀察模型建立的三個(gè)不同階段研究疾病發(fā)展過(guò)程并利用益氣活血藥對(duì)大鼠模型進(jìn)行干預(yù),進(jìn)一步探討模型建立方法的可靠性和穩(wěn)定性。2.材料和方法選用雄性WISTAR大鼠隨機(jī)分11組,第一個(gè)階段為造模2周,大鼠分為3組：A.空白組(CON2) n=8; B.疲勞運(yùn)動(dòng)模型組(M2)n=7；C.藥物反證組(D2)：雙參通冠方22.5mg/kg,造模同時(shí)給藥,持續(xù)2周n=8。第二個(gè)階段為造模4周,大鼠分為4組,每組8只：A.空白組(CON4)；B.假手術(shù)組(SHAM4); C.疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合結(jié)扎冠脈模型組(M4)；D.藥物反證組(D4)：雙參通冠方22.5mg/kg,冠脈結(jié)扎24小時(shí)后給藥,持續(xù)2周。第三個(gè)階段為造模6周,大鼠分為4組,每組8只：A.空白組(CON6)；B.假手術(shù)組(SHAM6)C.疲勞運(yùn)動(dòng)復(fù)合結(jié)扎冠脈模型組(M6)；D.藥物反證組(D6)：雙參通冠方22.5mg/kg,冠脈結(jié)扎24小時(shí)后給藥,持續(xù)4周。各階段結(jié)束后大鼠指標(biāo)檢測(cè)方法與第一部分實(shí)驗(yàn)相同。3.研究結(jié)果：3.1.1一般情況：造模2周,M2與CON2比較體重下降12.5%(P0.01)；D2與M2比較體重上升10.7%(P0.05)。造模4周,M4與SHAM4比較體重下降14.4%(P0.05)；D4與M4比較體重上升11%(P0.05)。造模6周,M6與SHAM6比較體重下降10.6%(P0.01)；D6與M6比較體重上升8.3%(P0.05)。3.1.2心臟結(jié)構(gòu)與功能：造模2周,M2與CON2比較射血分?jǐn)?shù)、短軸縮短率分別下降7.6%、10.9%(P0.05),左室舒張末內(nèi)徑下降6.2%(P0.01),左室舒張末容積下降13.6%(P0.01)；D2與M2比較射血分?jǐn)?shù)、短軸縮短率、左室舒張末內(nèi)徑、左室舒張末容積分別上升5.6%、8.6%、3.9%、9%(P0.05)造模4周,M4與SHAM4比較射血分?jǐn)?shù)、短軸縮短率分別下降46.1%、54%(P0.01),左室舒張末內(nèi)徑、左室收縮末內(nèi)徑分別上升27.4%、78.2%(P0.01),左室舒張末容積、左室收縮末容積分別上升71.2%、267.2%(P0.01)；D4與M4比較射血分?jǐn)?shù)、短軸縮短率分別上升6.9%、8.2%(P0.05),左室舒張末內(nèi)徑下降6.2%(P0.05),左室收縮末內(nèi)徑下降7.1%(P0.05),左室舒張末容積、左室收縮末容積分別下降12.7%、14%(P0.05)。造模6周,M6與SHAM6比較射血分?jǐn)?shù)、短軸縮短率分別下降54.5%、60.1%(P0.01),左室舒張末內(nèi)徑、左室收縮末內(nèi)徑分別上升20.9%、70.1%(P0.01),左室舒張末容積、左室收縮末容積分別上升53%、243.5%(P0.05 P0.01)；D6與M6比較射血分?jǐn)?shù)、短軸縮短率分別上升28.9%、29.4%(P0.05),左室舒張末內(nèi)徑、左室收縮末內(nèi)徑分別下降0.6%、7%(P0.05),左室舒張末容積、左室收縮末容積分別下降1.4%、17.4%(P0.05)。3.1.3生物學(xué)相關(guān)指標(biāo)：造模2周、4周、6周后,M與對(duì)照組比較血清ET、BNP、NT-proBNP、ATP synthase含量升高(P0.01),血清NO含量下降(P0.01)；D與M比較血清ET、BNP、NT-proBNP、ATP synthase含量下降(P0.01),NO含量升高(P0.01)。3.1.4心肌病理組織觀察：心肌MASSON、HE染色和電鏡觀察,造模2周、4周、6周后CON、SHAM組心肌組織正常,M組心肌出現(xiàn)不同程度病理性改變。D組心肌改變介于CON組與M組之間,病理性改變程度減輕。3.1.5證候特征表現(xiàn)：隨著造模時(shí)間延長(zhǎng),模型主癥、兼癥、舌象、脈象的表現(xiàn)愈加明顯。雙參通冠方治療能夠明顯改善造模2周、4周、6周部分主癥表現(xiàn)；能夠改善造模2周、4周、6周部分兼癥表現(xiàn),6周時(shí)作用明顯；能夠明顯改善造模2周、4周、6周脈象表現(xiàn)；對(duì)舌象無(wú)明顯改善作用。4.結(jié)論(1)造模2周后,通過(guò)跑臺(tái)建立的運(yùn)動(dòng)疲勞模型開(kāi)始表現(xiàn)出氣虛血瘀證的相關(guān)癥候；4周后,冠心病大鼠模型氣虛血瘀證相關(guān)癥候表現(xiàn)更加明顯；6周后,冠心病大鼠模型可以辨證為氣虛血瘀證。(2)冠心病氣虛血瘀證發(fā)展過(guò)程當(dāng)中能量代謝出現(xiàn)異常,對(duì)心肌細(xì)胞產(chǎn)生損傷；冠脈損傷后內(nèi)皮細(xì)胞的破壞對(duì)血管正常功能的維持產(chǎn)生了不良影響；隨著病變時(shí)間的延長(zhǎng),心肌損傷進(jìn)一步加重,導(dǎo)致心肌梗死的發(fā)生,心肌組織出現(xiàn)的嚴(yán)重病變影響心臟的收縮功能。(3)雙參通冠方對(duì)冠心病氣虛血瘀證大鼠運(yùn)動(dòng)耐受力、血管內(nèi)皮功能、能量代謝水平均有一定程度的改善。綜上所述,本文在通過(guò)對(duì)比四種不同模型建立方法后得出一種可靠的穩(wěn)定的冠心病氣虛血瘀證病證結(jié)合大鼠模型建立方法的基礎(chǔ)上,動(dòng)態(tài)觀察其病理演化過(guò)程并利用雙參通冠方進(jìn)行干預(yù),對(duì)模型建立的可靠性及雙參通冠方的藥效進(jìn)行了驗(yàn)證。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R-332;R259

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6 劉洋;參蛭通脈軟膠囊治療冠心病穩(wěn)定型心絞痛（氣虛血瘀證）的臨床研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2015年

7 王順英;力克敏鼻噴劑對(duì)鼻鼽（氣虛血瘀證）療效觀察及uLTD4的影響[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2015年

8 張先元;基于“絡(luò)病”理論運(yùn)用補(bǔ)陽(yáng)還五湯治療慢性肺源性心臟�。馓撗鲎C）的臨床研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2015年

9 田康;缺血性中風(fēng)病氣虛血瘀證患者的脈圖分析[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2015年

10 趙慧鵑;中風(fēng)參芪通絡(luò)顆粒劑治療缺血性中風(fēng)后(恢復(fù)期)疲勞(氣虛血瘀證)的臨床觀察[D];河南中醫(yī)學(xué)院;2015年

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