本文關(guān)鍵詞：人源吲哚胺2,3-雙加氧酶-2的表達(dá)與純化

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【摘要】：目的構(gòu)建人源吲哚胺2,3-雙加氧酶-2(human indoleamine 2,3-dioxygenase-2,hIDO2)原核表達(dá)載體,表達(dá)、純化獲得hIDO2蛋白。方法采用基因工程手段獲得hIDO2原核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株,篩選合適的重組質(zhì)粒及異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)濃度進(jìn)行蛋白表達(dá);通過親和層析純化重組hIDO2,BCA法測(cè)定蛋白濃度并計(jì)算蛋白收率;SDS-PAGE電泳檢測(cè)hIDO2表達(dá)情況,通過軟件分析得到蛋白純度;Western blot檢測(cè)目的蛋白特異性。結(jié)果重組質(zhì)粒經(jīng)電泳分析、雙酶切、DNA測(cè)序鑒定表明構(gòu)建成功;經(jīng)篩選發(fā)現(xiàn)重組質(zhì)粒pET28a-hIDO2比pGEX-4T-1-hIDO2的hIDO2表達(dá)效果好;SDS-PAGE電泳及Western blot均驗(yàn)證了在相對(duì)分子質(zhì)量45 000處的特異性目的條帶的存在;經(jīng)測(cè)定及計(jì)算得出蛋白純度為97.1%,蛋白濃度為20 mg/mL,蛋白收率為15 mg/L。結(jié)論成功構(gòu)建重組質(zhì)粒用于表達(dá)及純化hIDO2,蛋白濃度、純度、收率及特異性均較高。
【作者單位】： 復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)系;云南天然產(chǎn)物與生物制藥協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81373396,81573310) 高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(20130071110037)~~
【分類號(hào)】：R3411
【正文快照】： 吲哚胺2,3-雙加氧酶-2(indoleamine 2,3-dioxygenase-2,IDO2),是繼吲哚胺2,3-雙加氧酶-1(indoleamine 2,3-dioxygenase-1,IDO1)、色氨酸雙加氧酶(tryptophan 2,3-dioxygenase,TDO)之后,第3個(gè)被發(fā)現(xiàn)能夠催化色氨酸沿著犬尿氨酸途徑(kynurenine pathway,KP)代謝的限速酶,可催化

【相似文獻(xiàn)】

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1 張煒,殷長(zhǎng)傳,鄭佐華,蔡在龍,夏晴,毛裕民;耐熱鄰苯二酚2,3-雙加氧酶的高表達(dá)、純化及性質(zhì)[J];生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào);1998年06期

2 ;[J];;年期

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本文編號(hào)：1151645