發(fā)布時(shí)間：2017-11-05 08:08

  本文關(guān)鍵詞：重組溶葡萄球菌酶的PEG定點(diǎn)修飾

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【摘要】：為獲得高抗菌活性聚乙二醇(PEG)定點(diǎn)修飾的溶葡萄球菌酶(Lysn),根據(jù)該酶的高級(jí)結(jié)構(gòu),在它的催化域和結(jié)合域上優(yōu)選8個(gè)位點(diǎn)(Q9、N13、N40、T172、N174、G197、V240和T244),將其分別突變成半胱氨酸,純化后的溶葡萄球菌酶突變體經(jīng)DTT處理后與20 kDa的單甲氧基聚乙二醇馬來酰亞胺(m PEG-MAL)進(jìn)行定點(diǎn)修飾反應(yīng),RP-HPLC分析顯示PEG修飾率大于70%,修飾產(chǎn)物經(jīng)MacroCap SP陽離子交換層析純化后,PEG化溶葡萄球菌酶的純度大于95%。比濁法和最小抑菌濃度(MIC)實(shí)驗(yàn)表明20K-PEG-Lysn V240C和20K-PEG-Lysn T244C的抗菌活性維持在原來的50%左右。研究結(jié)果為溶葡萄球菌酶全身給藥治療金黃色葡萄球菌感染奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 上海高科聯(lián)合生物技術(shù)研發(fā)有限公司;復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)院遺傳學(xué)研究所遺傳工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：中國博士后科學(xué)基金(No.2014M551322) 上海市博士后科研資助計(jì)劃(No.14R21421300) 上海市工業(yè)菌株工程技術(shù)研究中心(No.13DZ2252000)資助~~
【分類號(hào)】：R3416
【正文快照】： 金黃色葡萄球菌是臨床主要病原菌,它能引起肺炎、骨髓炎、心內(nèi)膜炎及敗血癥等多種感染性疾病[1-2]。隨著抗生素的廣泛使用,金葡菌耐藥性問題日益突出,尤其是耐甲氧西林金葡菌(MRSA)[3-4]。MRSA已經(jīng)造成臨床治療上的困難及病死率增高,嚴(yán)重威脅人類健康[5-6]。溶葡萄球菌酶(Lyso

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 吳宏宇;黃晉江;張繼恩;黃青山;;抗溶葡萄球菌酶N端合成多肽抗體的制備與鑒定[J];生物技術(shù)通報(bào);2009年S1期

2 ;[J];;年期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陸海榮;溶葡萄球菌酶高效裂解細(xì)菌細(xì)胞壁的機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1143310