軟骨細(xì)胞膜蛋白低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1低表達(dá)的意義
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【摘要】:背景:腫瘤壞死因子α是骨關(guān)節(jié)炎主要致病因子,主要通過激活核因子KB信號通路活性實(shí)現(xiàn)軟骨細(xì)胞炎癥反應(yīng)。細(xì)胞膜蛋白低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1參與調(diào)節(jié)多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥反應(yīng)。目的:觀察大鼠軟骨細(xì)胞膜蛋白低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1對炎癥因子腫瘤壞死因子α反應(yīng)中的作用。方法:將慢病毒包裝的低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1-sh RNA轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞。轉(zhuǎn)染3 d后用核因子κB磷酸化抑制劑Bay 11-7082(10μmol/L)預(yù)處理的陰性對照組和sh LRP1組軟骨細(xì)胞30 min,腫瘤壞死因子α(30μg/L)分別作用兩組軟骨細(xì)胞30 min,收集總蛋白并進(jìn)入后續(xù)Western blot的實(shí)驗(yàn),測定相關(guān)胞內(nèi)信號蛋白表達(dá)情況,收集總RNA并行Real-time PCR實(shí)驗(yàn)檢測相關(guān)RNA表達(dá)情況。收集腫瘤壞死因子α(30μg/L)作用軟骨細(xì)胞12 h的培養(yǎng)基行ELISA檢測基質(zhì)金屬蛋白酶13表達(dá)水平。結(jié)果與結(jié)論:①慢病毒介導(dǎo)敲低低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1后的軟骨細(xì)胞腫瘤壞死因子α受體1表達(dá)增加;②腫瘤壞死因子α作用后的sh LRP1組軟骨細(xì)胞核因子k B通路較對照組均有明顯激活,誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)增加;3ELISA檢測提示sh LRP1組胞外基質(zhì)金屬蛋白酶13濃度增加;4結(jié)果提示,軟骨細(xì)胞膜蛋白低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1低表達(dá)對炎癥因子腫瘤壞死因子α的作用表現(xiàn)為激活核因子k B通路和提高骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的蛋白基質(zhì)金屬蛋白酶13表達(dá)以及易凋亡。
【作者單位】: 三峽大學(xué)人民醫(yī)院宜昌市第一人民醫(yī)院;武漢大學(xué)人民醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】: 軟骨細(xì)胞 腫瘤壞死因子α NF-kB 組織工程 組織構(gòu)建 低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白 慢病毒
【分類號】:R329.2
【正文快照】: 文章快速閱讀:文題釋義:sh RNA:short hairpin RNA的縮寫,短發(fā)夾RNA,包括兩個(gè)短反向重復(fù)序列,利用細(xì)胞內(nèi)的Dicer酶,生成相應(yīng)的干擾RNA,干擾RNA合成。NF-k B:NF-κB為一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子蛋白家族,NF-κB信號通路在細(xì)胞因子誘導(dǎo)的基因表達(dá)中起關(guān)鍵性的調(diào)控作用。軟骨細(xì)胞膜蛋白LRP1在
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