發(fā)布時(shí)間：2017-10-29 09:04

  本文關(guān)鍵詞：桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)表達(dá)的戊型肝炎病毒衣殼蛋白p495的純化、結(jié)構(gòu)解析以及免疫原性分析

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【摘要】：本研究目的是利用桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)建立戊型肝炎病毒(HEV)p495蛋白的高效穩(wěn)定表達(dá)和可放大純化的方法,研究其理化性質(zhì)和解析三維結(jié)構(gòu),與上市戊肝疫苗益可寧(Hecolin)進(jìn)行免疫原性的比較。本研究選擇基因1型HEV毒株的開放讀碼框2(ORF2)的aa112-606片段構(gòu)建桿狀病毒,感染昆蟲細(xì)胞進(jìn)行重組蛋白的表達(dá),經(jīng)過PEG沉淀和陰離子交換層析的純化,獲得純度為95%以上的p495蛋白,每升細(xì)胞培養(yǎng)液最終獲得15mg的目的蛋白。經(jīng)ELISA、分析超離、分子排阻色譜和電鏡負(fù)染等分析顯示p495蛋白具有良好的抗原性且呈現(xiàn)為均一的病毒樣顆粒(VLP),沉降系數(shù)為51.3S,顆粒直徑約20nm。冷凍電鏡三維結(jié)構(gòu)解析獲得分辨率為3.8姒的三維結(jié)構(gòu),揭示p495形成了T=1的等二十面體結(jié)構(gòu),與已報(bào)道的晶體結(jié)構(gòu)相一致。小鼠免疫實(shí)驗(yàn)表明p495蛋白與益可寧中p239抗原的免疫原性相當(dāng)。本研究為進(jìn)一步開展HEV的受體鑒定、表位結(jié)構(gòu)研究以及疫苗改進(jìn)等奠定良好的基礎(chǔ)。
【作者單位】： 廈門大學(xué)國家傳染病診斷試劑與疫苗工程技術(shù)研究中心生命科學(xué)學(xué)院;廈門大學(xué)分子疫苗學(xué)與分子診斷學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室公共衛(wèi)生學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 戊型肝炎病毒 病毒樣顆粒 真核表達(dá)系統(tǒng) HEVP蛋白冷凍電鏡三維重構(gòu) 免疫應(yīng)答
【基金】：國家自然科學(xué)基金(項(xiàng)目號(hào):81571996)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 戊肝病毒(Hepatitis E virus,HEV)是一種正鏈單股無包膜的RNA病毒,其基因組約為7.2kb。通常地,HEV是以病毒顆粒的形態(tài)存在,直徑約27~34nm,由單一衣殼蛋白組成正二十面體結(jié)構(gòu)。至今,重癥戊型肝炎仍是一項(xiàng)世界范圍內(nèi)較為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題,據(jù)估計(jì)全世界約1/3的人口感染戊肝病毒

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