本文關(guān)鍵詞：Sirt3過表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)

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【摘要】：目的:在HEK293細(xì)胞中獲得Sirt3全長基因,構(gòu)建其高效真核表達(dá)載體。方法:提取人HEK293細(xì)胞總RNA,反轉(zhuǎn)錄合成c DNA,以特異性引物擴(kuò)增Sirt3全長基因并克隆入pc DNA3.1載體,篩選陽性克隆進(jìn)行序列測定后,鑒定其表達(dá)情況。結(jié)果:PCR擴(kuò)增得到特異性的約1000 bp的片段,序列測定結(jié)果表明與國外已發(fā)表的序列完全一致;將構(gòu)建的pc DNA3.1-Sirt3質(zhì)粒轉(zhuǎn)入AGS和SGC-7901細(xì)胞,檢測到Sirt3的m RNA和蛋白表達(dá)水平均提高。結(jié)論:構(gòu)建獲得Sirt3基因高效真核表達(dá)載體,將用于Sirt3的功能研究。
【作者單位】： 陜西中醫(yī)藥大學(xué);青島大學(xué)附屬醫(yī)院;第四軍醫(yī)大學(xué);
【關(guān)鍵詞】： Sirt 基因擴(kuò)增 真核表達(dá)載體
【分類號】：Q78;R3416
【正文快照】： 安710032沉默信息調(diào)節(jié)因子2(silent information regula-tor 2,SIR2)是在研究酵母轉(zhuǎn)錄沉默時發(fā)現(xiàn)的[1-2]。Sirtuins是SIR2同源家族蛋白成員的總稱,其家族都是SIR2的同源物,包括SIRT1~SIRT7,主要分布于肝臟、肌肉、胰腺、睪丸、卵巢、脂肪組織及心臟[3]。Sir-tuins是高度保守的

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