本文關(guān)鍵詞：靶向調(diào)控大鼠海馬CNN3基因表達載體的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：目的建立可調(diào)控大鼠局部腦區(qū)CNN3基因表達的技術(shù),為進一步研究CNN3基因參與腦內(nèi)病理生理過程奠定基礎(chǔ)。方法設(shè)計并合成針對CNN3基因的全長編碼序列c DNA和3條sh RNA干擾靶點序列,利用基因工程技術(shù)構(gòu)建CNN3-OE和3個CNN3-sh RNA慢病毒載體,在立體定位儀引導下注入大鼠海馬,采用蛋白免疫印跡技術(shù)篩選CNN3基因的最佳沉默序列,并找出重組表達和沉默慢病毒載體調(diào)控海馬CNN3基因的變化規(guī)律。結(jié)果CNN3-OE和3個CNN3-sh RNA慢病毒干擾載體均構(gòu)建成功,轉(zhuǎn)染后8周內(nèi)對海馬CNN3基因水平均有一定調(diào)控作用,其中CNN3-sh RNA2載體組在轉(zhuǎn)染后的8周內(nèi)海馬CNN3基因編碼蛋白calponin-3水平均顯著性下調(diào),最高抑制率為73.26%;CNN3-OE慢病毒載體組中海馬calponin-3蛋白水平具有統(tǒng)計學意義的升高僅在轉(zhuǎn)染后第14天,上調(diào)率為93.88%。結(jié)論通過定位注射CNN3-OE和CNN3-sh RNA慢病毒載體可在體調(diào)控局部腦區(qū)CNN3基因表達,為后續(xù)的機制研究和開拓疾病防治新途徑奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院檢驗科;昆明醫(yī)科大學生物醫(yī)學工程研究中心;
【關(guān)鍵詞】： CNN 基因 沉默 重組 慢病毒載體
【基金】：國家自然科學基金地區(qū)基金(81260199) 云南省科技廳-昆明醫(yī)科大學聯(lián)合基金(2012FB030) 云南省衛(wèi)生科技計劃項目(2012WS0002)
【分類號】：R3416
【正文快照】： 1995年Maguchi等[1]首次分離出CNN3基因,其編碼的calponin-3蛋白可與肌動蛋白、鈣調(diào)蛋白、肌鈣蛋白和原肌球蛋白結(jié)合,不僅分布在肝、肺、腎、肌肉、皮膚、卵巢[2-5],還是calponin家族中唯一分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一個亞型,在大腦、小腦和腦血管均有表達[6-8],尤其是近年來研究

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 羅望;張泓;許淼;顧林;孫倍成;;慢病毒——基因轉(zhuǎn)移的潛在新載體[J];江蘇藥學與臨床研究;2006年06期

2 張驚宇;李金星;孫永奇;趙虹;楊子超;;大鼠海馬腦區(qū)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子慢病毒注射與表達的檢測[J];細胞與分子免疫學雜志;2009年07期

3 任振華;王淑艷;張穎;鄒春林;張愚;;慢病毒載體感染成年食蟹猴骨髓間充質(zhì)干細胞[J];生物工程學報;2010年06期

4 鄧昭玲;王彥;杜利清;劉強;趙輝;陳乃耀;;SIRT1基因shRNA慢病毒載體構(gòu)建及干擾效應檢測[J];中國組織工程研究;2012年28期

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本文編號：1087146