發(fā)布時(shí)間：2017-10-22 19:13

  本文關(guān)鍵詞：霍亂弧菌宿主整合因子β亞單位的可溶性克隆表達(dá)

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【摘要】：目的克隆表達(dá)霍亂弧菌全局性調(diào)節(jié)子宿主整合因子(integration host factor,IHF)β亞單位基因ihfB。方法以C7258染色體為模板,聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)擴(kuò)增ihfB基因,擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)NheⅠ和SapⅠ酶切后克隆入表達(dá)載體p XTB1;將ihfB的N端和α亞單位基因ihf A的C端通過(guò)搭橋PCR重組,重組片段N-ihfB-C-ihf A經(jīng)NheⅠ和SapⅠ雙酶切后克隆入表達(dá)載體p XTB1。重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸埃希菌ER2566,0.4 mmol/L IPTG誘導(dǎo)表達(dá),超聲裂解,上清經(jīng)CBD柱吸附純化,二硫蘇糖醇(DTT)柱上裂解洗脫。結(jié)果成功構(gòu)建表達(dá)野生型ihfB基因和嵌合體N-ihfB-C-ihf A的重組表達(dá)質(zhì)粒p XTB1-ihfB和p XTB1-N-ihfB-C-ihf A,并在宿主菌ER2566中誘導(dǎo)表達(dá)。p XTB1-ihfB為不溶性的包涵體表達(dá),p XTB1-N-ihfB-C-ihf A為可溶性表達(dá),并獲得高純度的表達(dá)產(chǎn)物。結(jié)論克隆表達(dá)了IHFβ亞單位基因ihfB,IHF-α的C端可顯著提高IHF-β的可溶性,獲得可溶性表達(dá)的純化IHF-β嵌合體蛋白,為后續(xù)調(diào)控功能研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所;
【關(guān)鍵詞】： 霍亂弧菌 宿主整合因子 ihfB 克隆表達(dá)
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81171640) 北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)項(xiàng)目(No.D131100005313016)~~
【分類號(hào)】：R378.3
【正文快照】： 病原菌隨環(huán)境的刺激而改變自身基因的表達(dá)能夠幫助其適應(yīng)環(huán)境從而增加生存機(jī)會(huì)。類核相關(guān)蛋白,如重組蛋白樣類核結(jié)構(gòu)蛋白(H-NS),宿主整合因子(IHF),Factor for Inversion Stimulation(Fis)等在這個(gè)過(guò)程中都具有相當(dāng)重要的作用。IHF是不對(duì)稱的組蛋白樣蛋白質(zhì),具有DNA結(jié)合活性,

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1079699